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BTN3071 血液RNA提取试剂盒
发布时间：2017-09-30 18:05 | 点击次数：507
血液RNA提取试剂盒说明书
产品编号：BTN3071
规格：50T/250T
产品及特点：
本产品是专门从全血样品中快速提取总RNA的试剂盒，主要用于提取全血细胞的总RNA(提取血浆病毒RNA 需使用病毒RNAout，提取纯化后的白细胞RNA 可使用动物RNA提取试剂盒)。
1. RNA 无明显降解和DNA 污染， OD260/280 均在1.9 以上。血液RNA
的产量与动物种类和动物的状态(如有疾病与否)有很大关系，人全血产量为2-6 μg/mL，兔全血产量为5-10 μg/mL。
2. 操作简单，直接使用新鲜的或冷冻的抗凝全血样品，不需裂解红细胞等任何预处理步骤，整个提取过程只需要十多分钟，可以全在室温下进行。
3. 处理量大，每管的样品处理量可以达到1.5 mL，高于进口的同类产品。
4. 与常用的抗凝剂(包括肝素，EDTA，柠檬酸钠，草酸钠)兼容，得到的RNA可以直接用于RT-PCR 和Northern 杂交等研究。
规格及成分：
保存条件：
常温运输，4℃保存，溶液B 和溶液C 有腐蚀性。4℃保存的溶液A 可能会产生白色沉淀，用前需65℃水浴加热直到沉淀溶解。有效期一年。
自备试剂：
氯仿，异丙醇，75%乙醇，RNA 溶解液（如液相RNase 清除剂）。
使用方法：
1. 将 0.2-1.5 mL 新鲜或解冻后的抗凝全血加入到1.5 mL 塑料离心管中，15000 g 室温离心3 分钟，弃上清(血浆)。如果此时血液细胞沉淀体积大于0.2 mL， 则需要减少血液的使用量，具体减少量需根据具体情况决定，因为各个个体(尤其是患者)血液中白细胞数目差别很大。如果提取0.1 mL 以下的微量血液样品最好加入百奥莱博的微量助沉剂RNADOWN。
2. 将 1 mL 溶液A 加入到血液细胞沉淀中，用移液枪吹打沉淀使细胞裂解。
3. 将 0.3 mL 的溶液B 和0.2 mL 氯仿加入离心管，剧烈震荡30 秒。
4. 13000-15000 g 室温离心5分钟，将上清液(为无色或浅红色，约0.5-0.9
mL)转移到另一干净离心管中。为防止污染，最好留100 μL 左右的上清液。下层有机相一般呈深红色，中间层为白色，含有DNA，蛋白质和其他细胞破碎物，避免触及或吸取。
5. 加入 0.5 mL 的溶液C 和0.2 mL 的氯仿到上清液中，用手上下剧烈摇晃30 秒。
6. 13000-15000 g 室温离心3 分钟，将上清液(无色，约1 mL)转移到另一干净离心管中，避免触及或吸取有机相及其上面的白色膜状物(蛋白质)。可以按每次吸取100-200 μL 的方式分批转移。
7. 在上清液中加入1/2 体积的溶液D，用手上下剧烈摇晃30 秒，溶液将呈白色浑浊状。
8. 13000-15000 g 室温离心5-30 分钟，小心移弃上清液，避免触及管底大量的白色RNA 沉淀。
9. 在离心管中加入1 mL 75%乙醇，振荡器上振荡混均30 秒。室温离心13000-15000 g 1分钟，RNA 此时在管底形成细小沉淀。小心吸弃上清液，注意不要吸弃RNA 沉淀。
10. 重复第9 步的75%乙醇清洗步骤一次。
11. 短暂快速离心数秒使管壁上残留液体沉到管底（约50 μL），用移液枪小心吸弃，注意不要吸弃沉淀。此步十分重要，因为残留的乙醇会影响后续反应。
12. 室温短暂放置2 分钟，立即加入适量(一般为10-30 μL)溶解液使RNA沉淀溶解。建议使用具有灭活残留RNase 功能的新型RNA 溶解液液相RNase Erasol 而不要使用经典的DEPC 水。千万不要用真空离心法使RNA 沉淀过于干燥，否则RNA将变得十分难溶。RNA 样品可以直接使用，也可以存放于-80℃长期保存。
疑难解答：
1．有的样品在第4 步离心后有很厚的中间层，上清很少。原因是蛋白质变
性不充分，可以适当减少血液的用量。白细胞多的血液容易产生这种情况。
2．有的样品在加入溶液D 离心后，沉淀上浮在液面，这是由于液体的比重大于沉淀，可以加入少量的超纯水使溶液的比重降低，直到沉淀能下去为止。也可能把下层的有机相取上来了，如果这样需要重做。
3．千万不要用真空离心法使RNA 沉淀过于干燥，否则将变得十分难溶。
4．无论使用甲醛变性胶还是非变性胶电泳时，一定要使用RNA 变性/上样液（如百奥莱博的RNAON）以让RNA 充分变性，否则加样孔中会有RNA复合物（人们会误以为是DNA污染）。使用没有变性能力的DNA 上样液不能使RNA 复合物分离。
5．测OD时一定要使用pH 8.0 的缓冲液（如TE），不要使用微酸性的DEPC水，否则OD 值会比真实的值低15-20%。
产品编号：BTN3071
规格：50T/250T
产品及特点：
本产品是专门从全血样品中快速提取总RNA的试剂盒，主要用于提取全血细胞的总RNA(提取血浆病毒RNA 需使用病毒RNAout，提取纯化后的白细胞RNA 可使用动物RNA提取试剂盒)。
1. RNA 无明显降解和DNA 污染， OD260/280 均在1.9 以上。血液RNA
的产量与动物种类和动物的状态(如有疾病与否)有很大关系，人全血产量为2-6 μg/mL，兔全血产量为5-10 μg/mL。
2. 操作简单，直接使用新鲜的或冷冻的抗凝全血样品，不需裂解红细胞等任何预处理步骤，整个提取过程只需要十多分钟，可以全在室温下进行。
3. 处理量大，每管的样品处理量可以达到1.5 mL，高于进口的同类产品。
4. 与常用的抗凝剂(包括肝素，EDTA，柠檬酸钠，草酸钠)兼容，得到的RNA可以直接用于RT-PCR 和Northern 杂交等研究。
规格及成分：
| 成分 | 50T | 250T |
| 溶液A | 50ml | 250ml |
| 溶液B | 15ml | 75ml |
| 溶液C | 25ml | 125ml |
| 溶液D | 25ml | 125ml |
| 说明书 | 1份 | 1份 |
常温运输，4℃保存，溶液B 和溶液C 有腐蚀性。4℃保存的溶液A 可能会产生白色沉淀，用前需65℃水浴加热直到沉淀溶解。有效期一年。
自备试剂：
氯仿，异丙醇，75%乙醇，RNA 溶解液（如液相RNase 清除剂）。
使用方法：
1. 将 0.2-1.5 mL 新鲜或解冻后的抗凝全血加入到1.5 mL 塑料离心管中，15000 g 室温离心3 分钟，弃上清(血浆)。如果此时血液细胞沉淀体积大于0.2 mL， 则需要减少血液的使用量，具体减少量需根据具体情况决定，因为各个个体(尤其是患者)血液中白细胞数目差别很大。如果提取0.1 mL 以下的微量血液样品最好加入百奥莱博的微量助沉剂RNADOWN。
2. 将 1 mL 溶液A 加入到血液细胞沉淀中，用移液枪吹打沉淀使细胞裂解。
3. 将 0.3 mL 的溶液B 和0.2 mL 氯仿加入离心管，剧烈震荡30 秒。
4. 13000-15000 g 室温离心5分钟，将上清液(为无色或浅红色，约0.5-0.9
mL)转移到另一干净离心管中。为防止污染，最好留100 μL 左右的上清液。下层有机相一般呈深红色，中间层为白色，含有DNA，蛋白质和其他细胞破碎物，避免触及或吸取。
5. 加入 0.5 mL 的溶液C 和0.2 mL 的氯仿到上清液中，用手上下剧烈摇晃30 秒。
6. 13000-15000 g 室温离心3 分钟，将上清液(无色，约1 mL)转移到另一干净离心管中，避免触及或吸取有机相及其上面的白色膜状物(蛋白质)。可以按每次吸取100-200 μL 的方式分批转移。
7. 在上清液中加入1/2 体积的溶液D，用手上下剧烈摇晃30 秒，溶液将呈白色浑浊状。
8. 13000-15000 g 室温离心5-30 分钟，小心移弃上清液，避免触及管底大量的白色RNA 沉淀。
9. 在离心管中加入1 mL 75%乙醇，振荡器上振荡混均30 秒。室温离心13000-15000 g 1分钟，RNA 此时在管底形成细小沉淀。小心吸弃上清液，注意不要吸弃RNA 沉淀。
10. 重复第9 步的75%乙醇清洗步骤一次。
11. 短暂快速离心数秒使管壁上残留液体沉到管底（约50 μL），用移液枪小心吸弃，注意不要吸弃沉淀。此步十分重要，因为残留的乙醇会影响后续反应。
12. 室温短暂放置2 分钟，立即加入适量(一般为10-30 μL)溶解液使RNA沉淀溶解。建议使用具有灭活残留RNase 功能的新型RNA 溶解液液相RNase Erasol 而不要使用经典的DEPC 水。千万不要用真空离心法使RNA 沉淀过于干燥，否则RNA将变得十分难溶。RNA 样品可以直接使用，也可以存放于-80℃长期保存。
疑难解答：
1．有的样品在第4 步离心后有很厚的中间层，上清很少。原因是蛋白质变
性不充分，可以适当减少血液的用量。白细胞多的血液容易产生这种情况。
2．有的样品在加入溶液D 离心后，沉淀上浮在液面，这是由于液体的比重大于沉淀，可以加入少量的超纯水使溶液的比重降低，直到沉淀能下去为止。也可能把下层的有机相取上来了，如果这样需要重做。
3．千万不要用真空离心法使RNA 沉淀过于干燥，否则将变得十分难溶。
4．无论使用甲醛变性胶还是非变性胶电泳时，一定要使用RNA 变性/上样液（如百奥莱博的RNAON）以让RNA 充分变性，否则加样孔中会有RNA复合物（人们会误以为是DNA污染）。使用没有变性能力的DNA 上样液不能使RNA 复合物分离。
5．测OD时一定要使用pH 8.0 的缓冲液（如TE），不要使用微酸性的DEPC水，否则OD 值会比真实的值低15-20%。