BTN3671 血液DNA提取试剂盒

血液DNA提取试剂盒说明书
产品编号：BTN3671
规格：150T
产品及特点：
本产品是基于经典离心法的、专门用于从新鲜或冷冻的动物(包括人和禽类)抗凝全血中提取基因组DNA的试剂。具有下列特点：
1. DNA纯净，OD260/OD280在1.8-2.0之间，可直接用于PCR、酶切、杂交等实验。DNA产量一般在30-50μg/mL全血。
2. 操作简单，整个过程约15分钟，室温操作，适合大规模样品处理。
3. 一次的血液处理量最多可达5mL，不需要柱子，不会发生其他同类产品经常发生的堵塞现象。
4. 价廉物美，与国外同类产品相比质量相当，但价格只有其一半左右。
5. 安全无毒，本试剂盒对人体无毒，无腐蚀性和刺激性气味。
规格及成分：

成分	规格
A型红细胞裂解液	100mL×3
血液DNAout溶液A	90mL
血液DNAout溶液B	45mL
说明书	1份

保存条件：
常温运输及保存，有效期一年。
自备试剂：
氯仿、异丙醇、75%乙醇。
使用方法：
1. 在装有抗凝血液的离心管中，按1：1的比例加入A型红细胞裂解液并轻柔颠倒混匀。
2. 5000-10000g室温离心2分钟，小心吸弃弃上清。
3. 将沉淀重悬于1/2体积(按最初血液的体积计算)的红细胞裂解液A型中，轻柔吹打混匀后5000-10000g室温离心2分钟。
4. 小心弃去上清，沉淀即为去除了红细胞和白细胞胞浆的白细胞细胞核。
5. 在白细胞细胞核中加入 0.6mL溶液A(溶液A用前需要充分摇匀)，用移液枪轻柔吹打混匀(剧烈吹打会打断DNA)。
6. 68℃水浴10分钟(此步可省略，但产量略有降低)。
7. 加入0.2mL氯仿和0.3mL溶液B，立即小心颠倒混匀。
8. 室温13000-15000g离心3分钟，小心将上清(约0.7mL)转移至一新的1.5mL塑料离心管中。
9. 加入等体积异丙醇(自备)，轻柔颠倒混匀5-8次，此时一般会出现絮状DNA沉淀。DNA可以用下列方法之一回收。
10. 方法一：可以用枪头将絮状DNA挑出，放在1mL 75%乙醇中几十秒使其中的盐离子进入乙醇中，然后再挑出DNA，在空气中放半分钟使乙醇挥发，再转移到0.1-0.3mL自备的TE缓冲液中溶解过夜(大分子的DNA需要长时间才能彻底溶解)。
11. 方法二：室温13000-15000g离心1分钟，去尽上清。在DNA沉淀中加入75%乙醇，震荡后室温13000-15000g离心1分钟，去尽上清(含盐离子)。重复75%乙醇洗涤一次。短暂离心，去尽残留75%乙醇(此步十分重要，不要省略，否则乙醇会影响DNA的溶解和后续的使用)，最后在DNA沉淀中加入0.1-0.3mL自备的TE缓冲液过夜溶解DNA待用。
疑难解答：
Q:本产品是否可以用于放量操作?
A:可以在大的离心管中进行放量操作，如每次处理5-100mL血液，只是客户需要单独购买红细胞裂解液，并按比例增加溶液A和溶液B的用量。
Q:冷冻血液为何DNA产量很低?
A:冷冻过程中形成的冰晶刺破了细胞膜和白细胞细胞核膜，红细胞裂解液处理时释放的DNA将进入上清并丢失，所以最后得到的DNA只是少数没有是被冰晶刺破的细胞的DNA。对冷冻血液，建议使用本公司的陈血DNA提取试剂盒或者在冷冻前直接将血液保存在血液DNA保存液中常温保存。
Q:本产品血液DNA提取得到的DNA含不含线粒体 ?
A:本产品用到的A型红细胞裂解液(单独的产品)裂解血液后得到是白细胞细胞核，所以不含。