BTN51207 Pfu DNA聚合酶

Pfu DNA聚合酶说明书
产品编号：BTN51207
规格：100U
产品及特点：
Pfu DNA Polymerase是Pyrococcus furiosis （激烈火球菌）DNA Polymerase基因在大肠杆菌中表达并经多次过柱纯化分离而得。可用于高保真PCR、长链PCR的扩增，还可以用于DNA片段的粘转平反应。
1.它具有3’-5’聚合酶活性，跟常用的Taq DNA聚合酶一样，能够用于PCR反应。
2.与Taq DNA Polymerase不同的是，它还具有3’-5’外切酶活性，能纠正DNA扩增过程中产生的碱基错配。
3.其出错率最低的是具有校正功能的耐高温DNA Polymerase中最低的。
4.Pfu DNA聚合酶比普通Taq DNA 聚合酶热稳定性更好，95℃ 1小时仍维持90％以上活性。
规格及成分：

成分	规格
Pfu DNA聚合酶 (3U/μL)	100U
10×Pfu Buffer	0.1ml
说明书	1份

保存条件：
低温运输，-20℃保存。
使用方法：
以λDNA为模板进行PCR扩增反应为例
1.按下列组份配制PCR反应液。                    

Pfu DNA聚合酶(3U/ μL)	0.5-1 μL
10×Pfu Buffer	5 μL
dNTP Mixture（各2.5 mM）	4 μL
模板DNA	见下
引物1（10 uM）	1 μL
引物2（10 uM）	1 μL
灭菌蒸馏水	Up to 50 μL

推荐50 μL PCR反应体系中模板DNA推荐使用量    

哺乳动物基因组DNA	0.5-1μg
酵母基因组DNA	5-500 ng
细菌基因组DNA	0.5-50 ng
质粒DNA	5-500 pg
PCR回收片段	1-100 pg

2.PCR反应条件
以λDNA为模板，扩增1 kbp的DNA片段的PCR反应条件如下：
94℃       3 min
94℃ 30 sec.     
55℃ 30 sec.        30-35cycles
72℃ 2 min.
72℃     5 min
注：PCR反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定最佳的反应条件（温度、时间等）。
注意事项:
PCR的反应液请在冰中配制，然后置于PCR反应仪上进行PCR反应。这种冷启动法（Cool Start Method）可增强PCR扩增的特异性，减少PCR过程中的非特异性反应，能得到良好的PCR结果。
相关资料:
10×Pfu Buffer的组成
10×Pfu Buffer                            
Tris–HCl (pH8.8)                 200 mM
KCl                               100 mM
(NH₄)₂SO₄                           100 mM
MgSO₄                              500 mM
活性定义
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74℃，30分钟内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位。
质控标准
1、SDS-PAGE 考马市亮蓝染色无杂带污染。
2、无核酸内切酶活性检测（切刻酶活力）、核酸外切酶活性、核酸酶活性检测。