BTN60105 加A试剂盒

加A试剂盒说明书
产品编号：BTN60105
规格：50T
产品及特点：
本产品利用Taq DNA polymerase 的不依赖于模板的末端转移酶活性，在只有dATP 存在的情况下，在平末端的DNA 片段加上一个dA 尾巴，使平末端片段也能被T 载体克隆。
1. 简单，2×Tailing Buffer 中含有所需要的所有成分,不需要单独准备。
2. 适用于任何平末端的DNA 片段，包括Pfu DNA polymerase 等酶合成的DNA 片段。
3. 产物可以直接用于与T 载体的连接。
格及成分：

成分	规格
Taq DNA polymerase (5U/μL)	50μl
2×Tailing Buffer	1.25ml
说明书	1份

保存条件：
低温运输，-20℃保存，有效期一年。
自备试剂：
PCR 片段、超纯水。
使用方法：
一：反应前纯化处理：
用Vent, Deep Vent, Pfu, Pwo 等具有3 到5 外切活性的DNA 聚合酶扩增得到的DNA片段，必须经过彻底的去除残留的酶的处理过程（如酚/氯仿抽提或Proteinase K处理），否则它们将在加A 反应时，切除掉加上的A尾巴，干扰反应。可以采取胶回收和酚/氯仿抽提法等常规方法纯化，最后溶解在水或TE 中，终浓度以0.1 ug/μL为宜。
二：加A反应
在干净的0.5 mL 或1.5 mL 离心管中，分别加入下列成分：
回收的DNA片段                 0.2-2 ug
2×dA Tailing Buffer           25 μL
Taq DNA polymerase（5 U/μL）  1 μL
补水到                         50 μL
72℃保温2 小时
三：反应后处理
加A反应后，Taq DNA polymerase 将与DNA末端紧密结合，所以必须酚/氯仿抽提去除。如果使用Proteinase K 处理后再用酚/氯仿抽提效果会更好。得到的DNA 溶于适量水和TE 中后即可用于T 载体的连接反应。