BTN60106 加T试剂盒

加T试剂盒说明书
产品编号：BTN60106
规格：50T
产品及特点：
本产品利用Taq DNA polymerase 的不依赖于模板的末端转移酶活性，在只有dTTP 存在的情况下，在平末端的DNA 片段加上一个dT尾巴，主要用于制备T载体。
1. 简单, 2X Tailing Buffer 中含有所需要的所有成分,不需要单独准备。
2. 适用于任何平末端的DNA片段，包括Pfu DNA成本polymerase 等酶合成的DNA片段。
3. 加T 后的载体可以作为T 载体使用。
格及成分：

成分	规格
Taq DNA olymerase(5U/μL)	50μl
2×dT Tailing Buffer	1.25ml
说明书	1份

保存条件：
低温运输，-20℃保存，有效期一年。
自备试剂：
平末端DNA片段、平末端质粒DNA。
使用方法：
一：反应前纯化处理：
平末端DNA 片段或平末端质粒DNA 可以采取胶回收和酚/氯仿抽提法等常规方法纯化，最后溶解在水或TE 中，终浓度以0.1μg/μL 为宜。必须注意的是, 用Vent, Deep Vent, Pfu, Pwo 等具有3 到5 外切活性的DNA 聚合酶扩增得到的DNA 片段，必须经过彻底的去除残留的酶的处理过程（如酚/氯仿抽提或Proteinase K 处理），否则它们将在加T 反应时，切除掉加上的T 尾巴，干扰反应。
二：加T 反应
在干净的0.5 mL 或1.5 mL 离心管中，分别加入下列成分：
回收的DNA片段                          0.2-2μg
2×dT Tailing Buffer                    25μL
Taq DNA polymerase（5 U/μL）           1μL
补水到                                  50μL
72℃保温2 小时
三：反应后处理
加T 反应后，Taq DNA polymerase将与DNA末端紧密结合，所以必须酚/氯仿抽提去除。如果使用Proteinase K处理后再用酚/氯仿抽提效果会更好。得到的DNA溶于适量水和TE中后即可用于后续连接反应。