BTN60107 DNA粘转平试剂盒

DNA粘转平试剂盒说明书
产品编号：BTN60107
规格：20T
产品及特点：
本产品利用Pfu DNA polymerase所具有3’到5’的聚合酶活性和5’到3’外切酶活性，将3’和/或5’突出的DNA 片段转化成平末端, 用于克隆工作。
1. 简单，精心优化过的2×Polishing Buffer 中含有所需要的所有成分，不需要单独准备。
2. 适用于任何平末端的DNA 载体。
格及成分：

成分	规格
Pfu DNA Polymerase（3U/μL）	20μl
2×Polishing Buffer	0.5ml
说明书	1份

保存条件：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。
自备试剂：
DNA片段。
使用方法：
1. DNA 片段的准备：
无论是来源Taq, Tth,T7, Klenow 和Vent等DNA聚合酶合成的DNA片段，还是用限制性内切酶制备的DNA 片段，粘转平之前均需要将DNA 沉淀以便去除反应液中的无关成份。沉淀DNA 的方法包括经典的盐/纯沉淀法，离心柱DNA 吸附法和百奥莱博的一管式非醇超快DNA 沉淀法。
2. 设置粘转平（Polishing）反应：
在一个干净的离心管中，分别加入
3’或5’突出的DNA 片段         10-500 ng
2×Polishing Buffer             25 μL
Pfu DNA polymerase              1 μL
补水到                          50 μL
72℃保温2小时。
注意：如果不使用热盖式PCR 仪器加热，则需要在反应管中再加入适量液体石蜡以防反应过程中水份蒸发。
3. 反应后处理
粘转平反应后，样品可以放-20℃长期保存，也可以直接用于T4 DNA连接酶催化的连接反应。对10μL的连接反应体系，一般需要加入1-2μL粘转平反应液。由于Pfu DNA polymerase在连接反应的温度条件下几乎没有活性，所以不必去除。但文献报道，去除后连接效率更高。