BTN60706 一管式DNA胶回收试剂

一管式DNA胶回收试剂说明书
产品编号：BTN60706
规格：30T/100T
产品及特点：
本产品可以直接从溶化的琼脂糖凝胶中沉淀回收单双链DNA 的产品，也堪称最快速的胶回收试剂,操作时间只有玻璃奶式和柱式胶回收方法的1/3 左右。本产品也可以用于单双链RNA 胶回收。
1. 超快，整个过程不到15分钟(对一个样品而言)，由溶胶（3分钟），放置（2分钟），沉淀（5分钟）和两次洗涤（各1-2分钟）几步组成。
2. 纯度高，回收产物可以直接用于连接、酶切、PCR、测序等各种反应，不影响后续酶反应。
3. 回收率高，一般大于50%。
4. 适用范围广，可用于回收普通琼脂糖凝胶能够分离的DNA 片段（一般在100 bp-50 Kb 之间），而柱式同类产品几乎都不能回收50 Kb 的超大片段。
5. 一管式操作，不需要任何样品转移步骤，使大片段DNA 保持完整，同时减少了污染的可能。
6. 既可用于回收单双链DNA，又可用于回收单双链RNA。
7. 扩容性好，可以在一个离心管中（包括15 mL 或50 mL 离心管）进行大规模回收，没有最大吸附量的限制；而柱式胶回收试剂都受最大吸附量的限制。
规格及成分：

成分	30T	100T
溶液A	9ml	30ml
溶液B	3ml	10ml
溶液C	30ml	100ml
说明书	1份	1份

保存条件：
常温运输, 4℃保存，有效期一年。
溶液A 呈淡黄色，溶液B 呈红色，如果颜色发生变化，则表示pH 已经改变，请弃之不用。溶液C 为无色液体，会在瓶底产生少量晶体状产生沉淀，用前无需溶化，避开沉淀直接取上清液使用）。
自备试剂：
TE 或无菌水。
使用方法：
1. 从琼脂凝胶上切下目的 DNA 片段，放入 1.5 mL 离心管中。尽可能多地去掉不含DNA 的胶。如果方便最好称重以便估计需要的溶胶液（空的1.5 mL 离心管EP 约0.9 克，一片普通胶片的重量在0.05-0.1 克左右）。
2. 按0.1 克胶加300 uL 溶液A 的比例加入溶液A，65℃保温3分钟使胶融化。其间可用摇晃几次以促进凝胶融化。如果放量使用，溶化胶的时间可能需要延长。
3. 待胶完全溶化后，按0.1 克胶加100 uL 溶液B 的比例加入溶液B, 充分混匀。如果回收20 Kb 以上的DNA 片段，混匀时需要温和震荡；对20 Kb 以下的DNA 片段，可以剧烈震荡。
4. 室温静置至少2分钟，此时管内将出现大量红色颗粒状沉淀。此步十分关键，不能省略而直接离心。
5. 13000 g 室温离心5分钟后, 小心吸弃上清，管底将有黄豆大小的红色沉淀。
6. 加入0.8 mL 溶液C，充分震荡混匀。注意：溶液C 瓶底有晶体状沉淀，用前无需溶解，但取用溶液C 时需要避开沉淀。
7. 13000 g 室温离心2分钟，小心吸弃上清，管底将有芝麻大小的白色沉淀。
8. 再用0.2 mL 溶液C 重复第6-7 步一次，管底还有芝麻大小的白色沉淀。
9. 小心吸弃上清后即得纯化的DNA 沉淀，加入少量TE 或水，充分吹打溶解。最后还会有少量白色不溶沉淀，属于正常现象。
疑难解答：
Q：电泳为何不能检测到回收的DNA？
A：最可能原因是各步加入溶液后没有充分震荡混匀，其次是沉淀在各步吸弃上清时候不小心吸走而丢失，三是溶液A和溶液B的pH发生改变。
Q：电泳时为何有残留荧光物在加样孔中？
A：可能是琼脂糖凝胶中的杂质吸附的DNA，吸取DNA 样品时最好短暂离心，只取上清液。这些不溶杂质一般不影响后续反应。使用高纯度的琼脂糖可以减少杂杂质的污染。我们一般使用OXOID 的琼脂糖，得到的DNA 可以用于常见的分子生物学后续反应。