BTN60807 柱式无内毒素质粒DNA提取试剂盒

柱式无内毒素质粒DNA提取试剂盒说明书
产品编号：BTN60807
规格：50T
产品及特点：
本产品是整合我们公司柱式质粒DNA提取和菌体内毒素清除剂两产品而成。菌体内毒素清除剂是我们公司独家推出的产品，在质粒提取前就把细胞壁上的内毒素清除掉，彻底避免了目前通用的先提取DNA+内毒素混合物，再从中纯化质粒DNA的弊端。用本产品提取的质粒DNA，内毒素的污染浓度低，适合于转染等对内毒素的污染敏感的实验。
1. 操作简单，只在经典的柱式质粒DNA提取前，增加菌体内毒素清除一步。
2. 去内毒素效果好，处理一次可以去除99%以上的内毒素。
3. 质粒丢失少，产率只比柱式质粒DNA提取低5-10%，效果好于先提质粒DNA，再用液相内毒素清除剂处理的方法。
4. DNA可以直接用于转染等实验。
规格及成分：

成分	规格
菌体内毒素清除剂	200ml
溶液A	13ml
溶液B	13ml
RNase A（10mg/mL）	150μl
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液2.0	10ml
说明书	1份

保存条件：
常温运输及保存，有效期一年。RNase A（10mg/mL）需要低温运输和保存。
自备试剂：
TE缓冲液（pH 8.0）或无菌水。
使用方法：
一: 用菌体内毒素清除剂清除E.coli细胞壁上的内毒素。
1. 收集1.5-3 mL E.coli饱和菌液，12,000 rpm离心1分钟，弃上清，得到细菌沉淀。
2. 加入1 mL本产品温和混匀后10,000-12,000 rpm离心1分钟，弃上清（含内毒素）。
3. 再重复上述操作3-4次，得到的菌体可以直接进入后续的质粒DNA提取步骤。
二：从无内毒素的E.coli中提取质粒DNA
1. 用1.5 mL离心管收集1-4 mL 过夜培养饱和菌液，12,000 rpm离心1分钟，弃上清，再短暂离心，吸弃残留液体。
2. 加入250 μL溶液A，用枪头充分吹打使菌体重悬。
3. 加入250 μL溶液B（如果有沉淀，用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用），温和反复颠倒混匀4-6次，看到溶液变粘即可。千万不要剧烈振荡。
4. 加入350 μL溶液C，反复颠倒混匀4-6次，可见白色沉淀物产生，然后冰上静止2-5分钟。注意：不要超过5分钟。
5. 室温12,000 rpm离心10分钟，将上清液转移到离心吸附柱中，室温放置2分钟。
6. 12,000 rpm离心1分钟，质粒DNA吸附到膜上，弃收集管中的废液。
7. 加入500 μL的通用洗柱液，12,000 rpm离心1分钟，弃收集管中的废液。注意：我们公司的通用洗柱液是由乙醇和含NaCl的溶液组成，NaCl在其中的溶解度较低，放置一段时间后可能会产生NaCl沉淀。如果有沉淀，用前最好加热使之溶解并混匀后使用。
8. 重复上步操作1次。
9. 12,000 rpm离心1分钟，甩干残留液体。此步不能省略，否则残留乙醇会影响后续的电泳上样（DNA沉不到加样孔里去）和酶反应。
10. 将离心柱置于新的1.5 mL离心管（自备）中，加入50 μL DNA洗脱液2.0，室温放置2分钟。
11. 12,000 rpm离心1分钟，离心管底溶液即质粒DNA。
12. 由于天我们公司的吸附柱结合DNA能力较强，需要再加入50 μL DNA洗脱液2.0到离心吸附柱中，室温放置2分钟，重复上步操作，往往还能洗脱下很多质粒DNA（相当于第一次洗脱的20-30%）。注意不要使用上步得到的含有DNA的洗脱液来进行第二次洗脱。
13. 将两次洗脱收集到的质粒DNA汇集即可立即使用或放冰箱保存。