BTN70903 一步法质粒DNA提取试剂盒2.0

一步法质粒DNA提取试剂盒2.0说明书
产品编号：BTN70903
规格：50T/100T
产品及特点：
基于碱变性原理的质粒小量制备(Miniprep)是分子克隆研究中最常用的方法之一，其操作包括三种溶液处理，一般需要30 分钟左右的时间才能得到可以上柱的质粒DNA 初提液。本产品采用百奥莱博自主开发的一步式细菌裂解技术，只需要一种溶液处理即可以完成细菌裂解，并且裂解物可以直接上柱纯化质粒DNA。本产品的主要特点是:
1. 一步式裂解细菌，比传统的碱变性方法更快捷。
2. 产量跟经典碱变性法相当或更高，产率一般为3-5 μg 质粒DNA/mL 饱和菌液（对高拷贝质粒而言）。
3. DNA 纯度高，OD260/280 一般在1.8 左右，基因组DNA 和RNA 污染少。
4. 可以直接用于电泳、酶切、PCR、细菌转化、分子克隆、测序等实验。
5. 重复性和稳定性好。
格及成分：

成分	50T	100T
溶液A	50ml	100ml
离心吸附柱	50只	100只
通用预洗液	50ml	100ml
通用洗柱液	100ml	200ml
DNA洗脱液2.0	10ml	20ml
说明书	1份	1份

保存条件：
常温运输及保存（溶液A需要4℃保存），有效期一年。
使用方法：
1. 用塑料离心管收集不超过3 mL 过夜培养饱和菌液，室温12000-15000 g 离心半分钟，弃上清。注意:不能超过3 mL 菌液，否则质粒回收率将急剧降低。
2. 加入 0.6-1 mL 溶液A(用前需摇匀)，充分吹打或振荡裂解细菌直到裂解变澄清，一般需要半分钟左右。注:此方法不同于碱裂解法，故可以充分吹打。
3. 将裂解液全部转移到离心吸附柱中，室温静置2 分钟使质粒DNA 与膜结合。室温12000-15000 g 离心半分钟，弃穿透液。如果一次不能将上清全部转移到离心吸附柱中，可以分两次进行。
4. 在离心吸附柱中加入0.7 mL 的通用预洗液，室温12000-15000 g 离心半分钟，弃穿透液。注意: 如果通用预洗液放置在低温产生了沉淀，用前需要加热到60℃左右使之融化，混匀后再用。
5. 再在离心吸附柱中加入0.3 mL 的通用预洗液，室温12000-15000 g 离心半分钟，弃穿透液。此步预洗最好别省略，否则DNA 纯度不高。
6. 在离心吸附柱中加入0.7 mL 的通用洗柱液，室温12000-15000 g 离心半分钟，弃穿透液。
7. 再在离心吸附柱中加入0.7 mL 的通用洗柱液，室温12000-15000 g 离心半分钟，弃穿透液。此为第二次洗涤。
8. 再在离心吸附柱中加入0.4 mL 的通用洗柱液，室温12000-15000 g 离心半分钟，弃穿透液。此为第三次洗涤，如果不洗涤三次，最后得到的质粒DNA 的OD260 和280 的比值达不到1.8。
9. 室温 12000-15000 g 离心半分钟，甩干残留液体。注意：此步不能省略，否则残留乙醇会影响后续的电泳上样（DNA 沉不到加样孔里去）和酶反应。
10. 将离心柱置于一个新的1.5 mL 自备塑料离心管中，加入30-100 μL DNA 洗脱液2.0，室温放置2 分钟。如果将DNA 洗脱液2.0 预热到65-80℃，则效果更好。
11. 室温 12000-15000 g 离心半分钟，离心管底溶液即质粒DNA，可以直接用于后续实验或放冰箱长期保存。
注意：如果需要去除DNA 样品中的内毒素，请使用百奥莱博的液相内毒素清除剂。