酵母tRNA溶液说明书
产品编号：BTN70904
规格：1.5mL(A)/1.5mL(B)
产品及特点：
本产品分A 和B 两个规格，浓度均为5mg/mL。A 是酵母tRNA 粗提液，用作制备更高纯度（如分子生物级）酵母tRNA 的原材料。B 是精提液，是经过本公司柱式RNAclean 纯化的分子生物学级别的酵母tRNA 溶液，不含蛋白质和DNA污染，OD260/OD280 在1.9 左右，可直接用作微量RNA 提取和回收的助沉剂，也可以用作原位杂交、Northern 杂交的封堵剂，对于探针为RNA 的杂交试验尤其适用。
规格及成分：

成分	1.5mL(A)	1.5mL(B)
酵母tRNA溶液	1.5ml（粗提液）	1.5ml（精提液）
说明书	1份	1份

保存条件：
低温运输，-20℃保存，有效期一年。
使用方法：
一：以tRNA 粗提液（BTN70904A）为材料，酚法制备tRNA 精提液（BTN70904B）
1. 在1 倍体积的tRNA 粗提液中加入一倍体积的自备Tris 饱和酚，振荡混匀后12000-15000 g 离心3 分钟得上清。
2. 在上清中再加入一倍体积的自备Tris 饱和酚和0.2 倍体积自备的氯仿，振荡混匀后12000-15000 g 离心3 分钟得上清。
3. 重复此步直到酚相和水相之间没有白膜出现。一般需要2-4 次抽提。
4. 在上清中加入0.1 倍体积的自备3M NaAc（pH5.2）和2 倍体积的自备无水乙醇，振荡混匀。
5. 12000-15000 g 离心15 分钟以上，小心移弃上清。
6. 用1mL 自备 75%乙醇洗一次（即加入1mL 75%乙醇，振荡混匀后12000-15000 g 离心5 分钟，小心移弃上清）。
7. 短暂离心数秒，小心移弃残留液体，所得沉淀即是精提的酵母tRNA，可以溶解在自备的DEPC 水中，UV 测定其浓度，然后直接用于各种分子生物学实验。
注意：tRNA 比较短，又是单链，所以电泳时结合EB 等染料的能力很弱，测定其浓度时最好不要使用电泳比较法，而要使用分光光度法。
注意：此法得率较高，但缺点是不能去除部分多糖污染，因为多糖也能在醇沉淀时沉淀下来。如果最后得到的溶液带颜色，则需要用本公司柱式RNAclean 精提，详细过程见该产品使用说明书。
二：tRNA 精提液（BTN70904B）作为核酸助沉剂

• 在核酸(DNA 或/和RNA)溶液中，加入适当浓度的盐离子，盐离子不同其终浓度也不相同，具体如下：

盐	终浓度
NH4OAc (醋酸铵）	0.5M
NaCl (氯化钠)	0.25M
NaOAc (醋酸钠）	0.3M

2. 加入本产品使其终浓度为20 μg/mL，混合均匀。
3. 加入两倍体积的乙醇，混合均匀。
4. 冰上放置15 分钟。
5. 12000-15000 g 离心15 分钟以上，小心移弃上清。
6. 用1mL 75%乙醇洗一次（即加入1mL 75%乙醇，振荡混匀后12000-15000g 离心5 分钟，小心移弃上清）。
7. 短暂离心数秒，小心移弃残留液体。
8. 将沉淀溶于适当缓冲液中待用。
注：由于tRNA 是多聚核苷酸激酶和末端转移酶的底物，因此如果回收的DNA 或RNA 要用于此类反应，就不能使用tRNA 作为助沉剂。如果回收的RNA 要用于RT-PCR，使用tRNA 可能会对反应的特异性产生干扰。
二：tRNA 精提液（70904B）作为杂交封堵剂
本产品可以作为原位杂交、Northern 杂交和RNA 斑点杂交的封堵剂，也可以作为Southern 杂交和DNA 斑点杂交的封堵剂，但不适于作为菌斑杂交。其在杂交液或预杂交液中的终浓度为100μg/mL。
如果使用RNA 探针，最好使用本产品做封堵剂，以保护RNA探针。