BTN71101 一步法大提质粒DNA提取试剂盒

一步法大提质粒DNA提取试剂盒说明书
产品编号：BTN71101
规格：5T
产品及特点：
本产品是在百奥莱博一步法质粒DNA提取试剂盒2.0（BTN70903）基础上开发的、能够快速从100 mL 左右的E.coli 培养液中取质粒DNA 的产品。它只需要一种溶液即可以完成细菌裂解，并且裂解物可以直接上柱纯化质粒DNA。
它比经典的碱变性质粒制备方法更加快捷和方便。本产品的主要特点是：
1. 快速，整个质粒DNA 提取过程只需要不到30 分钟，比传统的碱变性方法快捷。
2. 超螺旋比例高，独创的非碱法一步式细菌裂解技术，避免了强碱对DNA 的损害，得到的质粒DNA 切口更少。
3. DNA 纯度高，几乎没有基因组DNA 和RNA 污染，OD260/280 一般在1.7-1.9 之间。
4. DNA 可以直接用于电泳、酶切、PCR、细菌转化、分子克隆等实验。
5. 最大吸附量为600 μg DNA，具体产率取决于质粒拷贝数。
6. 过程简单，重复性和稳定性好。
格及成分：

成分	规格
溶液A	100ml
大离心吸附柱	5套
通用预洗液	100ml
通用洗柱液	100ml
DNA洗脱液	10ml
说明书	1份

保存条件：
常温运输及保存（溶液A 需要4℃保存），有效期一年。
使用方法：
1. 用50 mL 离心管分数次收集10-100 mL 新鲜的菌液，一般可以5000 rpm离心10 分钟，去除上清即得细菌沉淀。
2. 往细菌沉淀中加入20 mL 溶液A，充分振荡悬浮或吹打混匀。
注意：充分重悬细胞沉淀（无块状物）对于获得高的质粒产量十分重要。
3. 将裂解液全部转移到大离心吸附柱中，放入到配套的收集管中。
4. 6000 rpm 离心5-10 分钟，弃穿透液。离心过滤柱将吸附溶液中的质粒DNA，而将基因组DNA 和杂质在穿透液中。如果离心吸附柱中还有未离心下去的裂解液，可以适当延长离心时间直到离心吸附柱中没有残留液体。
5. 将10mL 通用预洗液加入到离心吸附柱中，室温静置2 分钟后6000 rpm离心5 分钟，弃穿透液。
6. 重复上步一次。
7. 将10mL 通用洗柱液加入到离心吸附柱中，室温静置2 分钟后6000 rpm离心5 分钟，弃穿透液。
8. 重复上步一次。
9. 室温6000 rpm 空甩5 分钟，弃穿透液。注意：此步很重要，不能跳过。
10. 将离心吸附柱放入一个自备的、干净的50 mL 塑料离心管中，加1 mL 通用洗脱液（洗脱液如加热到50-65℃效果更佳），室温静置2 分钟后6000rpm 离心5 分钟，收集液即是质粒DNA 溶液。
11. 重复上步1 次以便洗脱更多的质粒DNA。
12. 合并所得质粒DNA，立即使用或-20℃储存。
注意事项：
1．细菌培养时间一般为12-16 小时，但接种量大时应减少时间。过度培养会降低质粒的质量甚至导致质粒DNA 突变。
2．菌体过多会造成裂解液粘稠透，需要充分吹打，否则容易堵塞离心柱。
3．通用洗柱液洗涤离心柱后必须甩干一次，否则残留通用洗柱液中的乙醇会干扰后续实验。
4．质粒的具体产量跟细菌量、质粒拷贝数、质粒大小和操作规范程度密切相关。一般1.5 mL 过夜培养菌体可收获约10 μg 高拷贝质粒。
5．从生长旺盛的细菌中纯化的质粒在电泳中表现为2-3 条带有时甚至为4-6 条带均属正常，它们就是还未来得及分开的相套的质粒，易被误判为基因组DNA。