BTN71202 柱式血液RNA提取试剂盒

柱式血液RNA提取试剂盒说明书
产品编号：BTN71202
规格：50T
产品及特点：
本产品是在血液RNA提取试剂盒（BTN3071）基础上开发的柱式升级产品，专门从动物全血样品中快速提取总RNA。跟血液RNA提取试剂盒相比，本产品具有下列特点：
1. 比血液RNAOUT 更加简单快捷，直接使用新鲜的或冷冻的抗凝全血样品，不需裂解红细胞等任何预处理步骤，整个提取过程只需要十分钟左右，可以全在室温下进行。
2. 产量和纯度更高，OD260/280 均在2.0 左右，产率一般为2-5 μg/mL人血。
3. 每次微量提取的最大样品处理量可以达到1.5 mL，高于进口的同类产品。
4. 与常用的抗凝剂(包括肝素，EDTA，柠檬酸钠，草酸钠)兼容，得到的RNA可以直接用于RT-PCR 和Northern 杂交等研究。
规格及成分：

成分	50T
溶液A	50ml
溶液B	15ml
溶液C	50ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脱液	10ml
说明书	1份

保存条件：
常温运输，4℃保存，有效期一年。
自备试剂：
氯仿。
使用方法：
1. 将0.2-1.5 mL 新鲜或解冻后的抗凝全血加入到1.5 mL 塑料离心管中。
2. 12000-15000 g 室温离心3 分钟，弃上清(血浆)。如果此时血液细胞沉淀体积大于0.2mL，则需要减少血液的使用量，具体减少量需根据具体情况决定，因为各个个体(尤其是患者)血液中白细胞数目差别很大。
3. 将1 mL 溶液A 加入到血液细胞沉淀中，用移液枪吹打沉淀使细胞裂解。
4. 将0.3 mL 的溶液B 加入到离心管中，剧烈震荡30 秒。
5. 和0.2 mL 氯仿加入到离心管中，剧烈震荡30 秒。
6. 12000-15000 g 室温离心3-5 分钟，将上清液(为无色或浅红色，约0.5-0.9 mL)转移到另一干净离心管中。注意：转移的液体不要超过0.7mL，否则下一步不能加入等体积的溶液C。为防止污染，最好留100 uL左右的上清液。下层有机相一般呈深红色，中间层为白色，含有DNA，蛋白质和其他细胞破碎物，避免触及或吸取。
7. 加入等体积的溶液C，充分颠倒混匀。
8. 分两次将溶液转移到离心吸附柱中，每次转移后12000-15000 g 室温离心半分钟，弃穿透液。
9. 加0.7 mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。
10. 如果有必要，可以再加0.3 mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。
注意：增加此步可以进一步提高RNA 的纯度。
11. 室温12000-15000 g 离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA 的后续反应。
12. 将离心吸附柱转移到一个RNase-free 的收集管中，加入50-100 uL RNA洗脱液，室温放置1-2 分钟。
13. 12000-15000 g 室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA 样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
14. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA 电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子（BioTechniques，28：414，2000）。
15. RNA产量产率测定：将5-10μL RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度（1 OD260的RNA=40μg/mL），进而计算出RNA的产量（浓度X体积)和产率(RNA产量/组织用量)。人血RNA 产率一般为2-5μg/mL。
16. RNA 纯度测定：无污染的总RNA 的OD260/OD280 一般在2.0 左右(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR 等反应。
疑难解答：
Q: 如何去除RNA 样品中的DNA 污染？
A: 可以使用百奥莱博的非酶DNA 清除剂DNA ERASOL-2。
Q: 为何有的样品在第6 步离心后有很厚的中间层，上清很少。
A: 这是因为蛋白质变性不充分，可以适当减少血液的用量。白细胞多的血液容易产生这种情况。
Q: 离心吸附柱的RNA 最大吸附量是多少？
A: 是40μg。