BTN80101 一管式病毒DNA-RNA提取试剂盒

一管式病毒DNA-RNA提取试剂盒说明书
产品编号：BTN80101
规格：50T
产品及特点：
本产品是百奥莱博整合一管式病毒DNA提取试剂盒和一管式病毒RNA提取试剂盒两产品而得，专门用于从血清(血浆)等液体样品中同时提取病毒DNA (如HBV DNA)和病毒RNA (如HCV RNA 和HIV RNA)的产品。本产品灵敏度高，稳定性好，使用简单快捷，尤其适合于整合到临床PCR 或RT-PCR 检测试剂盒中。
1. 回收率高，可以达到90%以上，高于绝大部分基于离心柱的提取方法。可以跟QIAGEN 的同类产品媲美。
2. 灵敏度高，通过PCR 检测到病毒DNA 的最终灵敏度可以达到30 拷贝/mL样品，通过RT-PCR 检测到病毒RNA 的最终灵敏度可以达到50 拷贝/mL样品。
3. 一管式操作，减少了样品污染的可能。
4. 一站式套装，除样品外客户不需要准备任何试剂，降低了实验误差。
5. 安全无毒，不需要使用苯酚和氯仿等有机溶液。
6. 处理量大，如果加上病毒离心富集步骤，最多可以处理1.5 mL液体病毒样品。
7. 与PCR、荧光PCR、RT-PCR、荧光RT-PCR等后续反应兼容。
规格及成分：

成分	规格
溶液A	30ml
溶液B	40ml
溶液C	50ml
溶液D	10ml
说明书	1份

保存条件：
常温运输，溶液A 4℃保存，溶液B 和溶液C 室温保存，有效期一年。溶液B 和溶液C具有挥发性，使用后需要将瓶盖拧紧。
使用方法：
1. 将0.1-0.2 mL 液体样品转移到1.5 mL 旋盖离心管中。如果需要富集样品中的病毒，可以先将1.5 mL 液体样品转移到1.5 mL 旋盖离心管中,然后4℃ 24,000 g离心60 分钟，移弃1.3 mL 上清液后继续操作下一步的操作。
2. 加入0.6 mL 溶液A，盖上盖子后振荡3-5 秒。
注意:溶液A 用前需37℃-65℃水浴融化并充分摇匀后方可使用。
3. 室温静置10 分钟。
4. 加入0.6 mL 溶液B，盖上盖子后振荡3-5 秒。
5. 15,000 g 室温离心15 分钟。强烈建议在离心管管壁上用记号笔做简单标记以区别离心面和向心面。
6. 小心移弃上清。注意不要触及管底的DNA 和RNA 沉淀。
7. 加入1.0 mL 溶液C，振荡数秒后15,000 g 室温离心5 分钟。注意：将离心管放入离心机时一定要离心面向外。
8. 移弃上清，注意不要触及管底的DNA 和RNA 沉淀。
9. 短暂离心数秒, 注意：将离心管放入离心机时一定要离心面向外。
10. 小心移弃残留上清（残留的溶液C 会影响后续反应）。此时离心面的管壁上将有可见的膜状沉淀。
11. 加入100-200 μl 溶液D，用移液枪仔细吹打离心管管底和管壁的膜状沉淀，使其溶解。溶解液混浊或有少量不溶物是正常现象。不要离心只取上清使用，因为不溶沉淀物中含有DNA 和RNA，必须取混合液使用（哪怕很浑浊）。
12. 直接取适量样品用于PCR 或RT-PCR，也可短期保存于-20℃或-80℃。
使用效果：
DNA病毒：
 
图注：用本产品和市场上某同类产品分别提取0.2 mL HBV 阳性血浆(含1000拷贝/mL HBV)，DNA 溶于200 μL 溶液D 中，取5 μL 进行荧光PCR(使用MJ Research 的CHROMO4 荧光PCR 仪)。红和绿线表示本产品，蓝线表示市场上某同类产品。
 
 
RNA病毒：
 
图注：用本产品和市场上进口Q 公司同类产品分别提取0.2 mL 培养的 B 型流感病毒上清液(含1000 拷贝/mL 病毒)，RNA 溶于200 μL 溶液D 中，取10 μL 进行荧光PCR(50 μL 体系，使用MJ Research 的CHROMO4 荧光PCR 仪)。红线表示本产品，蓝线表示进口的Q 公司同类产品。
疑难解答：
Q：样品中如果同时有RNA 和DNA，DNA 会对RNA 的RT-PCR 克隆产生干扰吗？
A：不会。病毒一般或者只含RNA，或者只含DNA，如果样品中正好同时含有DNA 病毒和RNA 病毒，但由于两者之间没有同源性，所以DNA 也不会干扰RNA 的RT-PCR扩增。这跟组织细胞中提出的核酸样品不一样，因为后者的DNA 和RNA 是同源的，即任何RNA 分子都有与之同源的DNA 分子，所以如果同时存在，DNA 也会在RT-PCR 时跟引物结合，产生扩增。干扰RT-PCR。