BTN80102 柱式粪便DNA提取试剂盒

柱式粪便DNA提取试剂盒说明书
产品编号：BTN80102
规格：50T
产品及特点：
本产品是动物粪便DNA提取试剂盒（BTN70601）的柱式升级产品，专门用于从各种动物粪便中快速提取高质量的DNA。跟动物粪便DNA提取试剂盒，它具有下列特点：
1. 操作更加简单快速，一个样品只需要十多分钟的时间。
2. DNA 更加纯净，OD260/280 一般都在1.8 以上，得到的DNA 样品原液或稀释液可以直接用于PCR 扩增。
3. 每次微量提取可以处理100-300mg 左右的样品，能得到5 ug 左右DNA，片段长度在30 Kb 左右。
4. 可以同时提取到肠道上皮细胞和可能的肠道病原菌的DNA。
5. 试剂无毒无害, 环保。
规格及成分：

成分	规格
溶液A	25ml
溶液B	25ml
溶液C	50ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液2.0	10ml
说明书	1份

保存条件：
常温运输及保存，有效期一年。
自备试剂：
氯仿。
使用方法：
1. 65℃预热溶液A，待其沉淀溶化后充分混匀，取0.5 mL加入到1.5 mL塑料离心管中并放置于65℃待用。
2. 称取 0.1-0.3 g 的粪便，加入到含预热溶液A 的离心管中，震荡器上剧烈震荡5-10 分钟。如果是扩量操作，可以使用更多粪便和较大离心管。也可以将同一种粪便在较大离心管中震荡处理，然后再分到1.5 mL 离心管中。注意:不论使用大的还是小的离心管，一定要让管底的粪便震荡起来。
3. 将离心管置于65℃水浴中保温至少5 分钟。
4. 12000-15000 g 室温离心3 分钟，将上清转移到一新离心管中(上清液一般呈淡黄色或深棕色，实际颜色随样品而异，上清液的体积一般为300-400μL)。
5. 在上清液中加入等体积的溶液B，上下颠倒30 秒充分混匀，溶液将呈白色或淡黄色混浊状。
6. 将离心管冰浴至少5 分钟。
7. 12000-15000 g 室温离心3 分钟，转移上清到新的1.5 mL 离心管中，上清液颜色将比第4 步得到的上清的颜色稍淡，体积在0.7 mL 左右。
注意：下面第8-第9 步的氯仿抽提操作可以省略，直接进入第10 步，但DNA 的产量会低50%左右，OD260/280 在1.7-1.8。如果直接进入第10 步，则转移的溶液体积不要超过0.6 mL，否则没有空间加溶液C。
8. 加入 0.2 mL 的氯仿(自备)，震荡器上充分振荡30 秒混匀。注意:一定要让管底的溶液震荡起来。
9. 12000-15000 g 室温离心3分钟，小心转移上清到新离心管中。说明：离心后两相交界面将有白色膜状物，其中有机相部分颜色较深，一般呈淡棕色。将上清转移到新的1.5 mL 离心管时，不要超过0.6 mL，否则没有空间加溶液C。如果有多余的可以弃之不用。
10. 加入 1.5 倍体积的溶液C，上下颠倒30秒混匀。
11. 分两次上柱（即先转移一半的混合液到离心吸附柱中，12000-15000 g 室温离心半分钟，弃穿透液，然后再将剩下的混合液到离心吸附柱中，12000-15000g室温离心半分钟，弃穿透液）。
12. 加 0.7 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12000-15000 g 室温离心半分钟，弃穿透液。
13. 如果有必要，可以再加0.3 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12000-15000g室温离心半分钟，弃穿透液。增加一步洗涤能使最后得到的DNA 的纯度稍有提高，但产量稍微有所降低。
14. 12000-15000 g 室温再离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会污染DNA。
15. 将离心吸附柱转移到一新的1.5 mL塑料离心管中，加入50-100 μL DNA洗脱液2.0。
16. 室温放置离心吸附柱1-2 分钟。
17. 12000-15000 g 室温离心半分钟，离心管中溶液即为DNA 样品，可以立即使用或存放于冰箱待用。