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BTN80103 柱式细菌RNA提取试剂盒
发布时间：2017-09-30 20:41 | 点击次数：196
柱式细菌RNA提取试剂盒说明书
产品编号：BTN80103
规格：50T
产品及特点：
本产品是细菌 RNA提取试剂盒(BTN51102)的柱式升级产品，用于快速 从各种常见的革氏阴性细菌中提取总RNA。如需提取革氏阳性细菌的RNA，可以选择柱式真菌RNA提取试剂盒。跟细菌RNA提取试剂盒相比 它具有下列特点:
1. 操作更加简单快速，省去了最费时的离心步骤。
2. 所得 RNA 纯度更高，OD260/OD280 一般在 2.0 左右.
3. 一般不含基因 DNA 污染。
4. 适用于各种革氏阴性细菌。
5. 性价比高于进口同类产品。
规格及成分：
保存条件：
常温运输，4℃保存，有效期一年。
自备试剂：
氯仿。
使用方法：
下面的操作步骤是针对在 1.5 mL 塑料离心管中进行的微量提取的。
1. 新鲜配制裂解液。将溶液 A 和溶液 B 按 1:1 的比例混合。注意：溶液 A 和溶液 B 混合后必须立即使用，不要放置，否则会产生沉淀。一次处理 1.5mL 左右的细菌需要 0.6mL 新鲜配制的裂解液（即 0.3mL 溶液 A 和
0.3mL 溶液 B 的混合液）。
2. 在 1.5 mL 塑料离心管中离心收集 0.2-1.5 mL 新鲜细菌。注意:由于细菌 RNA 半衰期十分短，所以，必须使用最新鲜的、处于对数生长期的细菌。
3. 吸尽液体培养基，加入 0.6mL 新配制的裂解液，用枪充分吹打细菌沉淀， 确保细菌全部裂解，没有块状物。
4. 将裂解物转移至一个干净的 1.5 mL 塑料离心管中，然后加入 0.2 倍体积 的自备氯仿(1 mL 裂解物需 0.2 ml 氯仿)，振荡器上充分振荡混均 30 秒。
5. 12000-15000 g 室温离心 3-5 分钟。
6. 将上清液（约 0.6-0.8 mL）转移到离心吸附柱中。注意：离心后下层有 机相和中间层含有 DNA 和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和 DNA
污染。为保险起见，可以留下 100 uL 上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的丝状 DNA。
7. 12000-15000 g 室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
8. 加 0.7 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的 穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。但如果样品 OD260/280 比值不高，可以再用0.3mL通用洗柱液重复此步一次。
9. 室温 12000-15000 g 离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱 液会影响 RNA 的使用。
10. 将离心吸附柱转移到一自备的 RNase-free 收集管中，加入 50-100 uL RNA 洗脱液。
11. 室温离心半分钟，离心管中溶液即为 RNA 样品，可以立即使用或存放于
-80℃待用。
12. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做 Northern 杂交，强烈建议用户使 用甲醛变性胶进行 RNA 电泳，因为非变性胶不能分离所有的 RNA 分子
（BioTechniques，28：414，2000）。
13. RNA 产量产率测定：将 5-10 μL RNA 溶于 TE 缓冲液中(pH7.5-8.2 之 间)检测其在 OD260 的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA 浓度（1 OD260 的 RNA=40 μg/mL），进而计算出 RNA 的产量（浓度 X 体积)和产率(RNA 产量/组织用量)。
14. RNA 纯度测定：无污染的总 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之 间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分 别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响 RT-PCR 等反应。
疑难解答：
Q：上样孔里的红色荧光物一定是 DNA 污染吗？
A：不是。用 TAE 或 TBE 电泳液和非变性胶电泳 RNA 时容易产生此现象，百奥莱博初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链 RNA 通过碱基 互补或通过硼酸络合（如果使用 TBE 作电泳液的话）形成的复合物，加 RNase 处理后，这些红色荧光物(RNA)一般会消失。为避免此现象，建议 最好使用甲醛变性胶电泳和 RNA 专用上样液(如我们的 RNAon)。
Q：如何确认和去处除污染的基因组 DNA？
A：如果怀疑有 DNA 污染，可以用 RNase 处理 RNA 样品，然后再电泳。如 果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组 DNA 污染。进一步确认 可以使用 PCR 扩增法。去除污染的 DNA 可以使用百奥莱博的非酶的 DNA 去除剂 DNA Erasol 或 RNase-free DNase，由于 RNase-free DNase 一 般都有残留 RNase 污染，所以必须严格按照厂家提供的使用手册进行操作。
产品编号：BTN80103
规格：50T
产品及特点：
本产品是细菌 RNA提取试剂盒(BTN51102)的柱式升级产品，用于快速 从各种常见的革氏阴性细菌中提取总RNA。如需提取革氏阳性细菌的RNA，可以选择柱式真菌RNA提取试剂盒。跟细菌RNA提取试剂盒相比 它具有下列特点:
1. 操作更加简单快速，省去了最费时的离心步骤。
2. 所得 RNA 纯度更高，OD260/OD280 一般在 2.0 左右.
3. 一般不含基因 DNA 污染。
4. 适用于各种革氏阴性细菌。
5. 性价比高于进口同类产品。
规格及成分：
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 30ml |
| 溶液B | 20ml |
| 离心吸附柱 | 50套 |
| 通用洗柱液 | 50ml |
| RNA洗脱液 | 10ml |
| 说明书 | 1份 |
常温运输，4℃保存，有效期一年。
自备试剂：
氯仿。
使用方法：
下面的操作步骤是针对在 1.5 mL 塑料离心管中进行的微量提取的。
1. 新鲜配制裂解液。将溶液 A 和溶液 B 按 1:1 的比例混合。注意：溶液 A 和溶液 B 混合后必须立即使用，不要放置，否则会产生沉淀。一次处理 1.5mL 左右的细菌需要 0.6mL 新鲜配制的裂解液（即 0.3mL 溶液 A 和
0.3mL 溶液 B 的混合液）。
2. 在 1.5 mL 塑料离心管中离心收集 0.2-1.5 mL 新鲜细菌。注意:由于细菌 RNA 半衰期十分短，所以，必须使用最新鲜的、处于对数生长期的细菌。
3. 吸尽液体培养基，加入 0.6mL 新配制的裂解液，用枪充分吹打细菌沉淀， 确保细菌全部裂解，没有块状物。
4. 将裂解物转移至一个干净的 1.5 mL 塑料离心管中，然后加入 0.2 倍体积 的自备氯仿(1 mL 裂解物需 0.2 ml 氯仿)，振荡器上充分振荡混均 30 秒。
5. 12000-15000 g 室温离心 3-5 分钟。
6. 将上清液（约 0.6-0.8 mL）转移到离心吸附柱中。注意：离心后下层有 机相和中间层含有 DNA 和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和 DNA
污染。为保险起见，可以留下 100 uL 上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的丝状 DNA。
7. 12000-15000 g 室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
8. 加 0.7 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的 穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。但如果样品 OD260/280 比值不高，可以再用0.3mL通用洗柱液重复此步一次。
9. 室温 12000-15000 g 离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱 液会影响 RNA 的使用。
10. 将离心吸附柱转移到一自备的 RNase-free 收集管中，加入 50-100 uL RNA 洗脱液。
11. 室温离心半分钟，离心管中溶液即为 RNA 样品，可以立即使用或存放于
-80℃待用。
12. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做 Northern 杂交，强烈建议用户使 用甲醛变性胶进行 RNA 电泳，因为非变性胶不能分离所有的 RNA 分子
（BioTechniques，28：414，2000）。
13. RNA 产量产率测定：将 5-10 μL RNA 溶于 TE 缓冲液中(pH7.5-8.2 之 间)检测其在 OD260 的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA 浓度（1 OD260 的 RNA=40 μg/mL），进而计算出 RNA 的产量（浓度 X 体积)和产率(RNA 产量/组织用量)。
14. RNA 纯度测定：无污染的总 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之 间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分 别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响 RT-PCR 等反应。
疑难解答：
Q：上样孔里的红色荧光物一定是 DNA 污染吗？
A：不是。用 TAE 或 TBE 电泳液和非变性胶电泳 RNA 时容易产生此现象，百奥莱博初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链 RNA 通过碱基 互补或通过硼酸络合（如果使用 TBE 作电泳液的话）形成的复合物，加 RNase 处理后，这些红色荧光物(RNA)一般会消失。为避免此现象，建议 最好使用甲醛变性胶电泳和 RNA 专用上样液(如我们的 RNAon)。
Q：如何确认和去处除污染的基因组 DNA？
A：如果怀疑有 DNA 污染，可以用 RNase 处理 RNA 样品，然后再电泳。如 果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组 DNA 污染。进一步确认 可以使用 PCR 扩增法。去除污染的 DNA 可以使用百奥莱博的非酶的 DNA 去除剂 DNA Erasol 或 RNase-free DNase，由于 RNase-free DNase 一 般都有残留 RNase 污染，所以必须严格按照厂家提供的使用手册进行操作。