BTN80201 一步法无内毒素质粒DNA提取试剂盒

一步法无内毒素质粒DNA提取试剂盒说明书
产品编号：BTN80201
规格：50T
产品及特点：
本产品是在百奥莱博一步式质粒DNA提取试剂盒2.0（BTN70903）和液相内毒素清除剂（BTN60607）两产品的基础上开发出来的无内毒素质粒DNA提取试剂。用本产品提取的质粒DNA，内毒素的污染浓度低，适合于转染等对内毒素的污染敏感的实验。此产品的特点是：
1. 在提取质粒前去除内毒素(存在于细菌表面)，从源头上避免料内毒素和质粒DNA 接触，从根本上防止了内毒素对质粒DNA 的污染。
2. 独创的一步法质粒DNA 提取技术，操作快捷，只需要5-10分钟。
3. 质粒回收率高，一次处理后90%的质粒DNA 可以回收回来。
4. 得到的质粒DNA 可以直接用于转染等实验。
格及成分：

成分	规格
菌体内毒素清除剂	200ml
溶液A	50ml
吸附柱活化液	25ml
离心吸附柱（小提）	50只
离心吸附柱（小提）套管	50只
通用预洗液	50ml
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液2.0	10ml
说明书	1份

保存条件：
常温运输及保存(溶液A 最好4℃保存)，有效期一年。
使用方法：
一: 菌体内毒素的清除
1. 收集1.5-3 mL E.coli 饱和菌液，12000 rpm 离心1分钟，弃上清，得到细菌沉淀。
2. 在沉淀中加入1 mL 菌体内毒素清除剂，温和混匀后10000-12000rpm离心1分钟，弃上清（含内毒素）。
3. 再重复上述操作3 次，得到的菌体沉淀可以直接进入下面的一步法质粒DNA 提取操作。
二：一步法质粒DNA提取
4. 在菌体沉淀中加入0.6 mL 溶液A(用前需摇匀)，充分吹打或振荡30 秒裂解细菌，直到裂解液变澄清（一般需要半分钟左右）。注:此方法丌同于碱裂解法，故可以充分吹打或振荡。
5. 活化离心吸附柱：在离心吸附柱中加入0.5 mL 吸附柱活化液，套上收集管后室温放置2分钟，然后12,000 rpm 离心2分钟，倒弃穿透液，再将吸附柱套上收集管后待用。活化后的离心吸附柱必须立即使用。如果丌活化，质粒得率将低20-40%左右。
6. 将第4 步得到的裂解液全部转移到离心吸附柱中，室温静置2分钟使质粒DNA 不膜结合。注意：必须静止2分钟，否则质粒DNA 丌容易吸附上。
7. 室温12000-15000 g 离心半分钟，弃穿透液。
8. 在离心吸附柱中加入0.6 mL 的通用预洗液(注意:是通用预洗液，丌是通用洗柱液，丌要用错。通用预洗液非常容易产生沉淀，用前需要加热到60℃左右使之融化，混匀后再用)，室温12000-15000 g 离心半分钟，弃穿透液。
9. 在离心吸附柱中加入0.6 mL 的通用洗柱液，室温12000-15000 g 离心半分钟，弃穿透液。
10. 在离心吸附柱中加入0.4 mL 的通用洗柱液，室温12000-15000 g 离心半分钟，弃穿透液。
11. 室温12000-15000 g 离心半分钟，甩干残留液体。
12. 将离心柱置于一个新的1.5 mL 自备塑料离心管中，加入30-100 uL DNA洗脱液2.0，室温放置2分钟。
13. 12000-15000 g 离心半分钟，离心管底溶液即无内毒素质粒DNA。