BTN80602 柱式凋亡DNA提取试剂盒

柱式凋亡DNA提取试剂盒说明书
产品编号：BTN80602
规格：50T
产品及特点：
本产品细胞凋亡是一种正常的生物学现象，其显著特点之一是细胞染色体被一种内源性核酸内切酶降解，酶切部位在核小体之间的DNA 上，所以这种降解具有位置专一异。由于真核生物相邻核小体之间的DNA 长度（包括缠绕在核小体上的部分和连接部分）一般是180-200bp，所以细胞凋亡所产生的凋亡DNA 片段都是180-200bp 的整倍数，电泳时呈非常有规律的梯状图谱，故称之为凋亡DNALadder。由于只有凋亡细胞才产生凋亡DNA Ladder，所以可以通过检测样品DNA中是否有DNA Ladder 来判断组织中是否有细胞凋亡过程发生。本产品就是专门用来从组织和培养细胞中提取凋亡DNA 的产品，它具有下列特点：
1. 对小片段DNA 的回收率高于普通的基因组DNA 提取方法。
2. 对大片段DNA 回收率低于普通的基因组DNA 提取方法，降低了电泳时它对凋亡DNA 的干扰，增加了检测的特异性。
3. 使用一步式细胞裂解法，操作上比两步法简单（两步法需要先分离细胞核和胞浆，再从胞浆中分离凋亡DNA），同时DNA 释放更充分，DNA 产量更高。
4. 柱式操作，得到的DNA 纯度高，可以直接用于电泳或标记。
5. 适用于血液，培养细胞和实体组织。
规格及成分：

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	50ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液	10ml
说明书	1份

保存条件：
常温运输、有效期一年。
自备试剂：
氯仿（也可省略，但产量会降低），细胞凋亡诱导试剂。
使用方法：
1. 溶液A 和溶液B 在放置在4℃放置可能会产生沉淀，用前需要在65℃水浴中加热直到沉淀全部溶解，用前还需要充分摇匀。
2. 根据使用材料的不同进行下列操作，注意最好做正常细胞的对照。
a) 对贴壁细胞：吸尽培养液，在每10平方厘米细胞中加入1 mL 溶液A，用枪充分吹打以确保细胞全部裂解。
b) 对悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，在每1-5×10⁶悬浮细胞中加入1 mL溶液A，用枪充分吹打以确保细胞全部裂解。如果是fibroblasts 或carcinoma cell，1 mL 溶液A 的细胞使用量不要超过1×10⁶个细胞。
c) 对新鲜或冷冻的组织：先将剪切成小块的新鲜组织或冷冻保存的组织放入10mL 或15 mL 塑料离心管中，每50-100 mg 组织加1 mL 溶液A，用匀浆器匀浆30 秒左右。对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织（细胞中含大量正在复制的DNA），建议每50 mg 组织的使用1mL 溶液A。
d) 对DNALOCKER 保存组织：先用纸吸去DNALOCKER 液体后再剪切成小块，其余操作同新鲜或冷冻组织的处理。
3. 小心将裂解物转移至一个干净的1.5 mL 塑料离心管中。
4. 12000-15000 g 室温离心3-5 分钟。
5. 小心将上清液转移到一新的离心管中。
注意：下面第6-8 步的氯仿抽提操作可以省略，直接进入第9 步，但DNA 的产量会低30%左右，OD260/280 不受影响。
6. 加入0.2 倍体积的自备氯仿，振荡器上充分振荡混均30 秒。
7. 12000-15000 g 室温离心3-5 分钟。
8. 小心将不超过0.75 mL 的上清液转移到一新的离心管中。
9. 加入等体积的溶液B，充分混匀。
10. 分两次上柱（即先转移一半的混合液到离心吸附柱中，12000-15000 g 室温离心半分钟， 弃穿透液， 然后再将剩下的混合液到离心吸附柱中，12000-15000 g 室温离心半分钟，弃穿透液）。
11. 加0.5 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12000-15000 g 室温离心半分钟，弃穿透液。
12. 加0.5 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12000-15000 g 室温离心半分钟，弃穿透液。
13. 12000-15000 g 室温再离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会污染DNA。
14. 将离心吸附柱转移到一新的1.5 mL 塑料离心管中，加入50-100 μL 通用洗脱液。
15. 室温放置离心吸附柱1-2 分钟。
16. 12000-15000 g 室温离心半分钟，离心管中溶液即为凋亡DNA 样品，可以立即使用或存放于冰箱待用。