BTN80807 动物细胞裂解液

动物细胞裂解液说明书
产品编号：BTN80807
规格：50mL(A)/50mL(B)
产品及特点：
本产品含有多种细胞裂解成分和蛋白酶抑制成分，可以在非变性或变性条件下迅速裂解组织或培养细胞，使之释放出细胞内蛋白，用于后续实验。
它具有以下优点：
1. 快速裂解，多种裂解成分经过精心优化，能快速使细胞裂解。
2. 非变性（BTN80807A）产品能最大程度地保留蛋白天然结构和功能，主要用于免疫沉淀和免疫共沉淀，还可以用于蛋白活性检测（信号传递研究和酶动力学检测）和Western Blot 等各种后续实验。
3. 变性（BTN80807B）裂解细胞的效率更高，主要用于对抗原空间构型不敏感的免疫共沉淀实验，还可以用于Western Blotting。
4. 适用于培养细胞（包括悬浮细胞）和新鲜组织。
格及成分：

成分	A型	B型
动物细胞裂解液	50ml	50ml
说明书	1份	1份

保存条件：
常温运输、4℃保存，有效期一年。
自备试剂：
PBS缓冲液
使用方法：
注意事项
1、 如果在本产品中额外再加入终浓度为1×的、新鲜配制的蛋白酶抑制剂复合物，可以更有效地抑制蛋白酶活性，防止蛋白降解。
2、 如果用于信号传递研究，最好在本产品中加入终浓度为1×的、新鲜配制的磷酸酶抑制剂复合物。
3、 整个裂解步骤都要在冰浴或4℃操作。本产品和PBS 均需预先冷却。
4、 本产品所含有较高浓度的去垢剂会对Bradford 蛋白浓度测定有较大影响，因此只能使用BCA 法测定蛋白浓度。
一：处理贴壁的培养细胞
1、 去除贴壁细胞培养液，用冰浴预冷的PBS 洗两遍，去尽残留的PBS。
2、 将培养板放置在冰上待用。
3、 按每10⁶个细胞加入0.1 mL 本产品（或100mm 贴壁细胞加1mL 本产品）的比例向培养板中加入适量的本产品（按此比例裂解得到的裂解物的蛋白浓度约在5-10 mg/mL 之间）。
注意：裂解效率跟细胞数量和本产品用量的比例密切相关。一般情况下6孔板的单孔(1～2×10⁶细胞)需要0.1～0.2 mL 本产品；25 cm² 培养瓶(3～6×10⁶细胞)需要0.3~0.6 mL；75 cm² 培养瓶(1～2×10⁷细胞)需要1～2mL。对于特别大或特别小的细胞，需要用户摸索最佳用量。
4、 冰上放置10-30分钟（最佳时间跟细胞系相关），其间偶尔轻轻摇晃或用枪头轻轻吹打。
5、 将细胞培养板倾斜使上清液汇集在一端，并将其全部转移到一个新的1.5mL塑料离心管中。
6、 15,000×g，4℃离心10分钟，将上清转移到一个新的1.5 mL 塑料离心管中，放置在冰上待用或放-80℃长期保存。注意：如果用于免疫沉淀，最好新鲜使用。
7、 使用前最好先测定上清液的蛋白浓度，然后再进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。
二：处理悬浮细胞
1、 400×g，4℃离心10分钟收集悬浮细胞，弃上清。
2、 用等体积的预冷PBS 洗涤细胞沉淀两遍，步骤同第一步。
3、 按每106 个细胞加入0.1 mL 本产品的比例加入本产品，充分悬浮细胞。
4、 冰上放置15分钟裂解细胞，期间偶尔轻柔震荡。
5、 15,000×g，4℃离心10分钟，将上清转移到一个新的1.5 mL 塑料离心管中。为避免吸取到细胞沉淀，最好留20-40uL 液体不取。
6、 将上清液放置在冰上待用或放-80℃长期保存。注意：如果用于免疫沉淀，最好新鲜使用。
7、 使用前最好先测定上清液的蛋白浓度，然后再进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。
三：处理组织块
1、 称量组织块，用毛玻片或玻璃匀浆器研磨或匀浆，用5-10 倍体积的、预冷的PBS 洗两次(包括冲洗器材)。
2、 将匀浆物转移到离心管中，1500g、4℃离心5分钟后弃上清。
3、 按每50 mg 组织加入0.2 mL 本产品的比例加入预冷的本产品，吹打混匀，放置冰上。
4、 每隔5分钟振荡器轻柔振荡一次，共4 次。
5、 15,000×g、4℃离心10分钟，将上清转移到一个新的1.5 mL 塑料离心管中，放置在冰上待用或放-80℃长期保存。注意：如果用于免疫沉淀，最好新鲜使用。

• 使用前最好先测定上清液的蛋白浓度，然后再进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。