BTN80810 一站式SDS-PAGE电泳套装

一站式SDS-PAGE电泳套装说明书
产品编号：BTN80810
规格：30T
产品及特点：
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)是目前电泳法变性分离蛋白质的主要方法，但是单独配制各种溶液十分繁琐，为此我们公司开发了本产品。它具有下列特点:
1. 一站式，即开即用，用户不需单独准备各种成分，十分方便。
2. 安全，将实验人员接触粉末状丙烯酰胺的可能降到最低。
3. 灵活，分开提供的丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺便于配制各种比例和浓度的SDS-PAGE，满足分离各种大小不同的蛋白质的要求。
4. 使用改良的浓缩胶缓冲液，由于其含有染料，制备的浓缩胶呈蓝色，便于上样时识别加样孔。
5. 电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。
规格及成分：

成分	规格
丙烯酰胺干粉	60g
甲叉双丙烯酰胺干粉	3g
分离胶缓冲液，4×	200ml
浓缩胶缓冲液，4×（含染料）	100ml
TEMED	1.5ml
过硫酸铵（干粉）	1g
SDS-PAGE上样液，5×	1套（1mL）
SDS-PAGE电泳液，1×（干粉）	1套（20L）
说明书	1份

保存条件：
常温运输和保存，但TEMED和5×SDS-PAGE上样液需低温运输，分别在4℃和-20℃有效期一年。
自备试剂：
去离子水。
使用方法：
1. 第一次使用本产品时需先配制30%丙烯酰胺溶液:在本产品提供的装有60克丙烯酰胺干粉的塑料瓶中加入146 mL自备的去离子水，充分摇晃直到溶解即得200 mL 30%丙烯酰胺溶液（用手大约摇10-20分钟）。
2. 第一次使用本产品时还需配制30%丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺（19:1）溶液(30% AB溶液，下同): 不同实验需要加入不同比例的甲叉双丙烯酰胺。对SDS-PAGE电泳，丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺比例一般在19:1左右，因为此时PAGE胶的孔径最小，分辨率最高。制备方法是将3g甲叉双丙烯酰胺干粉加入到200 mL上步配好的30%丙烯酰胺溶液中(注意：甲叉双丙烯酰胺干粉有神经毒性，避免吸入粉末)。配好的30%ＡＢ溶液最好4℃避光保存并在１月内用完。
3. 根据平板的面积和胶的厚度估计需要配制的浓缩胶和分离胶的体积。并根据要分离的蛋白质的大小确定选择浓缩胶和分离胶的浓度，参考下表：

蛋白质大小范围（kD）	最佳浓缩胶浓度	最佳分离胶浓度
15-45	4%	15%
15-60	4%	12.5%
18-75	4%	10%
30-120	4%	7.5%
60-200	不需要	5%

注：如果上样体积少于10μL，可以不需要浓缩胶。
4. 配制10%的APS（过硫酸铵）：称0.1克过APS干粉到1 mL去离子水中，摇晃溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周。
5. 配制分离胶：在一个25 mL的三角瓶中，先按下表的用量加入水、30%ＡＢ溶液和4×分离胶缓冲液。以下是配制10 mL胶的用量，更大体积则各成分用量需按比例增加。丙烯酰胺溶液有神经毒性，一定要戴手套操作。

胶浓度	用量（单位：mL）
	水	30%AB溶液	4×分离胶配胶液
5%	5.83	1.67	2.50
6%	5.50	2.00	2.50
7%	5.17	2.33	2.50
7.5%	5.00	2.50	2.50
8%	4.83	2.67	2.50
9%	4.50	3.00	2.50
10%	4.17	3.33	2.50
11%	3.83	3.67	2.50
12%	3.50	4.00	2.50
13%	3.17	4.33	2.50
14%	2.83	4.67	2.50
15%	2.50	5.00	2.50
16%	2.17	5.33	2.50

6. 配制浓缩胶（一般使用4%的浓度）：在一个25 mL的三角瓶中，先按下表的用量加入水、30%ＡＢ溶液和4×浓缩胶缓冲液。以下是配制10 mL 4%浓缩胶的用量，丙烯酰胺溶液具有神经毒性，一定要戴手套操作。

胶浓度	用量（单位：mL）
	水	30%AB溶液	4×浓缩胶缓冲液 （含蓝色染料）
4%	6.17	1.33	2.50

7. 将分离胶和浓缩胶溶液摇晃混匀，抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气（氧气能抑制丙烯酰胺聚合反应，不去除将影响丙烯酰胺聚合反应）。
8. 分别加入50 μL 10%APS和30-50 μL TEMED（这是配制10 mL分离胶和浓缩胶的用量，更大体积的胶则用量需按比例增加），迅速摇匀。
9. 先灌分离胶，在胶的液面距离顶部1.5 cm的时候，停止灌胶。
10. 由于分离胶比重较大，可以立即在上面灌浓缩胶，但灌注时必须小心，不要破坏分离胶和浓缩胶的液面，在浓缩胶液面达到顶部时停止灌胶，插入梳子，室温聚合30-60分钟。如果不能做到小心灌浓缩胶，则必须待分离胶室温聚合30-60分钟后再灌制。
11. 拔出梳子，用1×SDS-PAGE电泳液冲洗加样孔。
12. 将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽加入足够的1×SDS-PAGE电泳液。本产品提供20升的SDS-PAGE电泳液干粉，将所有干粉溶解在2 L水中即得10×SDS-PAGE电泳液，用时再稀释成1×工作液。
13. 在蛋白质样品中加入5×SDS-PAGE上样液（4μL样品中加1μL上样液），100℃煮沸3-5分钟。短暂离心，取上清上样。
14. 先用10 mA的电流电泳（对0.75mm厚×14cm×14cm的胶）直到染料进入从浓缩胶进入分离胶。
15. 将电流增加到15 mA，直到染料进入分离胶底部时终止电泳，取出凝胶进行后续的实验处理。