产品分类
公司新闻
BTN80814 Bradford法蛋白定量试剂盒
发布时间：2017-09-30 20:53 | 点击次数：247
Bradford法蛋白定量试剂盒说明书
产品编号：BTN80814
规格：100mL/200mL
产品及特点：
Bradford 法测定蛋白质浓度是最为常用的蛋白检测方法之一，在酸性条件下，考马斯亮蓝（Coomassie G-250）染料能与蛋白质结合形成复合物，其最大吸光值也由465 nm 转移到595 nm，通过颜色的强弱测定蛋白质浓度的高低。本产品是基于Bradford 法蛋白检测原理开发的产品，具备下述特点：
1. 快速，10-20个样品只需要10分钟即可完成测定。
2. 稳定，加样混匀后2 分钟既可测定，1小时内吸光度变化不超过10%。
3. 线性范围在 50～1000μg/mL。
4. 最小测量体积为1-20μL，最低测量蛋白量为0.5μg。
5. 即开即用，不需要单独购买每个成分再配制。
6. 有常规和微量两种检测模式。
7. 不受绝大部分样品中的化学物质的影响。巯基乙醇的浓度可高达1M，二硫苏糖醇的浓度可高达5 mM。
8. 但受略高浓度的表面活性剂影响，各种蛋白质与染料的结合效率可能有差异。
规格及成分：
保存条件：
常温运输和保存，BSA 标准-20℃保存，有效期一年。
自备试剂：
无菌水。
使用方法：
一．常规检测流程：
此方法在蛋白浓度30-1000μg/mL范围内呈现R2 = 0.996的直线线性回归，可精确定量蛋白浓度在此范围内的蛋白样品。
1. 制备 1×工作液。溶液A 与无菌水按1：4 比例充分混合即为1×工作液 (例：4 mL 溶液A + 16 mL 无菌水 = 20 mL 1×工作液)。
2. 滤纸过滤。过滤后的工作液室温条件下可稳定使用1-2 星期。
3. 检测：蛋白样品与1×工作液按1：50 比例混合 (例：100 μL 蛋白样品 + 5mL 1×工作液，适用于3 mL 的比色杯；40 μL 蛋白样品 + 2 mL 1×工作液，适用于1 mL 的比色杯；20 μL 蛋白样品 + 1 mL 1×工作液，适用于平底透明96 孔板）。
4. 加样后，充分混匀。
5. 室温放置5 分钟。
6. 检测吸光度。波长设定 = 595 nm。
注意事项：
1. 不同型号、规格的滤纸，具有不同的孔径，导致可通过的分子各不相同。请使用本公司指定提供的滤纸，否则会导致不同的测定结果。
2. 检测样品之前，应首先制备蛋白标准曲线。一般可使用BSA。
a) 常规检测：建议使用下述浓度的BSA。
0μg/mL、31.25μg/mL、62.5μg/mL、125μg/mL、250μg/mL、500μg/mL、750μg/mL、1000 μg/mL
b) 微量检测：建议使用下述浓度的BSA。
0μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、7.5μg/mL、10μg/mL、20 μg/mL。
3. 检测细胞提取物或纯化蛋白样品，应使用相应的缓冲液制备蛋白标准曲线。
4. 用 96 孔板测定时，应确保没有气泡，否则会绝对增加吸光度的读数。
5. 此检测试剂不受绝大部分样品中的化学物质的影响。巯基乙醇的浓度可高达1M，二硫苏糖醇的浓度可高达5 mM。但受略高浓度的表面活性剂影响。若SDS 高于0.1%，TritonX-100 高于0.1%，Tween20，60，80 高于0.06%，可取少量样品加水稀释到适当浓度，再行测定。
二．微量检测流程：
此方法在蛋白浓度1～20 μg/mL 范围内呈现R2 = 0.992 的直线线性回归，可精确定量蛋白浓度在此范围内的蛋白样品。
1. 蛋白样品与溶液A 按4：1 比例混合。
例：400 μL 蛋白样品 + 100 μL 溶液A，适用于平底透明96 孔板；
2 mL 蛋白样品 + 0.5 mL 溶液A，适用于1 mL 的比色杯；
4 mL 蛋白样品 + 1 mL 溶液A，适用于3 mL 的比色杯。
2. 加样后，充分混匀。
3. 室温放置5 分钟。
4. 检测吸光度。波长设定= 595 nm。
注意事项：
1. Bradford 蛋白浓度测定的显色反应受许多去污剂的影响。应避免使用SDS，Triton X-100，Tween 等溶解蛋白样品。对于难溶解的蛋白样品，可用1MNaOH 溶解和稀释。
2. Bradford 蛋白浓度测定的显色反应依赖于蛋白中精氨酸残基的数目，因此不同蛋白间测定的差异可能较大。
3. 标准品曲线配制时，如果吸量不准确或者加样枪不精确会造成标准曲线相关系数减小，可根据需要使用倍比梯度稀释的方法来配制，或者使用精确度高的加样枪。
4. 由于 Bradford 法在蛋白浓度增高到一定时候，颜色反应并不成比例增加，因此得到的标准曲线只是在一定范围内可以近似看成直线，每次应按照实际测得的标准曲线计算出相对精确的蛋白浓度。
5. 不像其它一些蛋白浓度测定方法（包括Lowry 法），Bradford 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品中巯基乙醇的浓度可高达1M，二流苏糖醇的浓度可高达5mM。但受略高浓度的去垢剂影响。需确保SDS低于0.125%，Triton X-100 低于0.125%，Tween 20 低于0.06%，可以考虑用超纯水稀释，透析/除盐，ACETONE/TCA 沉淀蛋白后重溶于超纯水等方法来消除干扰物质的影响。
产品编号：BTN80814
规格：100mL/200mL
产品及特点：
Bradford 法测定蛋白质浓度是最为常用的蛋白检测方法之一，在酸性条件下，考马斯亮蓝（Coomassie G-250）染料能与蛋白质结合形成复合物，其最大吸光值也由465 nm 转移到595 nm，通过颜色的强弱测定蛋白质浓度的高低。本产品是基于Bradford 法蛋白检测原理开发的产品，具备下述特点：
1. 快速，10-20个样品只需要10分钟即可完成测定。
2. 稳定，加样混匀后2 分钟既可测定，1小时内吸光度变化不超过10%。
3. 线性范围在 50～1000μg/mL。
4. 最小测量体积为1-20μL，最低测量蛋白量为0.5μg。
5. 即开即用，不需要单独购买每个成分再配制。
6. 有常规和微量两种检测模式。
7. 不受绝大部分样品中的化学物质的影响。巯基乙醇的浓度可高达1M，二硫苏糖醇的浓度可高达5 mM。
8. 但受略高浓度的表面活性剂影响，各种蛋白质与染料的结合效率可能有差异。
规格及成分：
| 成分 | 100ml | 200ml |
| 溶液A | 100ml | 200ml |
| BSA 标准（2 mg/mL） | 1ml | 1ml |
| 滤纸 | 20张 | 20张 |
| 说明书 | 1份 | 1份 |
常温运输和保存，BSA 标准-20℃保存，有效期一年。
自备试剂：
无菌水。
使用方法：
一．常规检测流程：
此方法在蛋白浓度30-1000μg/mL范围内呈现R2 = 0.996的直线线性回归，可精确定量蛋白浓度在此范围内的蛋白样品。
1. 制备 1×工作液。溶液A 与无菌水按1：4 比例充分混合即为1×工作液 (例：4 mL 溶液A + 16 mL 无菌水 = 20 mL 1×工作液)。
2. 滤纸过滤。过滤后的工作液室温条件下可稳定使用1-2 星期。
3. 检测：蛋白样品与1×工作液按1：50 比例混合 (例：100 μL 蛋白样品 + 5mL 1×工作液，适用于3 mL 的比色杯；40 μL 蛋白样品 + 2 mL 1×工作液，适用于1 mL 的比色杯；20 μL 蛋白样品 + 1 mL 1×工作液，适用于平底透明96 孔板）。
4. 加样后，充分混匀。
5. 室温放置5 分钟。
6. 检测吸光度。波长设定 = 595 nm。
注意事项：
1. 不同型号、规格的滤纸，具有不同的孔径，导致可通过的分子各不相同。请使用本公司指定提供的滤纸，否则会导致不同的测定结果。
2. 检测样品之前，应首先制备蛋白标准曲线。一般可使用BSA。
a) 常规检测：建议使用下述浓度的BSA。
0μg/mL、31.25μg/mL、62.5μg/mL、125μg/mL、250μg/mL、500μg/mL、750μg/mL、1000 μg/mL
b) 微量检测：建议使用下述浓度的BSA。
0μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、7.5μg/mL、10μg/mL、20 μg/mL。
3. 检测细胞提取物或纯化蛋白样品，应使用相应的缓冲液制备蛋白标准曲线。
4. 用 96 孔板测定时，应确保没有气泡，否则会绝对增加吸光度的读数。
5. 此检测试剂不受绝大部分样品中的化学物质的影响。巯基乙醇的浓度可高达1M，二硫苏糖醇的浓度可高达5 mM。但受略高浓度的表面活性剂影响。若SDS 高于0.1%，TritonX-100 高于0.1%，Tween20，60，80 高于0.06%，可取少量样品加水稀释到适当浓度，再行测定。
二．微量检测流程：
此方法在蛋白浓度1～20 μg/mL 范围内呈现R2 = 0.992 的直线线性回归，可精确定量蛋白浓度在此范围内的蛋白样品。
1. 蛋白样品与溶液A 按4：1 比例混合。
例：400 μL 蛋白样品 + 100 μL 溶液A，适用于平底透明96 孔板；
2 mL 蛋白样品 + 0.5 mL 溶液A，适用于1 mL 的比色杯；
4 mL 蛋白样品 + 1 mL 溶液A，适用于3 mL 的比色杯。
2. 加样后，充分混匀。
3. 室温放置5 分钟。
4. 检测吸光度。波长设定= 595 nm。
注意事项：
1. Bradford 蛋白浓度测定的显色反应受许多去污剂的影响。应避免使用SDS，Triton X-100，Tween 等溶解蛋白样品。对于难溶解的蛋白样品，可用1MNaOH 溶解和稀释。
2. Bradford 蛋白浓度测定的显色反应依赖于蛋白中精氨酸残基的数目，因此不同蛋白间测定的差异可能较大。
3. 标准品曲线配制时，如果吸量不准确或者加样枪不精确会造成标准曲线相关系数减小，可根据需要使用倍比梯度稀释的方法来配制，或者使用精确度高的加样枪。
4. 由于 Bradford 法在蛋白浓度增高到一定时候，颜色反应并不成比例增加，因此得到的标准曲线只是在一定范围内可以近似看成直线，每次应按照实际测得的标准曲线计算出相对精确的蛋白浓度。
5. 不像其它一些蛋白浓度测定方法（包括Lowry 法），Bradford 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品中巯基乙醇的浓度可高达1M，二流苏糖醇的浓度可高达5mM。但受略高浓度的去垢剂影响。需确保SDS低于0.125%，Triton X-100 低于0.125%，Tween 20 低于0.06%，可以考虑用超纯水稀释，透析/除盐，ACETONE/TCA 沉淀蛋白后重溶于超纯水等方法来消除干扰物质的影响。