BTN80817 mRNA提取试剂盒

mRNA提取试剂盒说明书
产品编号：BTN80817
规格：25T
产品及特点：
构建cDNA文库、蛋白质的体外翻译和RT-PCR方法检测稀有的mRNA等研究常常需要从总RNA中分离mRNA，mRNA只占总RNA的1%左右，但由于带poly（A）尾巴，所以可以通过与Oligo（dT）纤维素的亲和结合而与其他RNA（如rRNA、tRNA等）分离开。本产品专门用于从总中提取mRNA，它具有下列特点：
1. 一站式，由柱式动物RNA提取试剂和mRNA提取试剂两个产品整合而成，即开即用，非常方便。
2. 一次可以处理50-100 mg的动物组织，能得到约10-15μg总RNA，从中可得0.1-0.5μg左右的mRNA。
3. Oligo（dT）纤维素吸附能力强，每克可以吸附50-80 OD的mRNA，相当于2000-3000μg mRNA。
4. mRNA提取过程操作简单，只需要离心就可以完成，免去了常规的灌柱、洗柱等繁琐操作。
5. 得到的mRNA可以直接用于构建cDNA文库、蛋白质的体外翻译和RT-PCR。
规格及成分：

成分	规格
结合液	100ml
Oligo(dT)纤维素	25mg
无RNase水	10ml
微量核酸沉淀剂	10ml
说明书	1份

保存条件：
常温运输，4℃保存，Oligo(dT)纤维素长期放置最好放-20℃，有效期一年。
使用方法：
本产品提供本产品提供25 mg Oligo(dT)纤维素，每克Oligo(dT)纤维素能够结合50-80 OD的mRNA。
1. 在一个1.5 mL塑料离心管中称取1 mg Oligo (dT)纤维素。将0.5 mL结合液加入到一管装有1 mg Oligo (dT)纤维素的离心管中，混匀后室温放置5分钟。也可以将250 μL 结合液加入到装有25 mg Oligo(dT)纤维素的离心管中，每次取10 μL（相当于1 mg Oligo (dT)纤维素）与0.5 mL结合液混匀，室温放置5分钟。剩余部分放-80℃保存。
2. 200 g离心30秒，小心吸弃上清后留Oligo (dT)纤维素沉淀待用。
3. 将自备的总RNA 100 μL（如果体积不足100 μL，用水补足），65℃加热5分钟。
4. 加入等体积的结合液，混匀后冷却到室温后，全部转移到装有Oligo(dT)纤维素的离心管中。
5. 混匀后室温放置5分钟，期间颠倒混匀数次。
6. 4℃ 200 g离心5分钟，小心将上清转移到一个离心管中。此上清液是去除了mRNA的总RNA。可以冰箱保存作为阴性对照。
7. 加入0.5 mL结合液，混匀后4℃ 200 g离心5分钟，小心弃上清。
8. 重复上步2-4次。
9. 加入50 μL 无RNase水，混匀后4℃ 200 g离心5分钟，小心收集上清（mRNA）。
10. 重复上步1-3次。
11. 将各次收集的mRNA混合，即为mRNA溶液。
12. 按微量核酸沉淀剂的方法沉淀mRNA，具体操作如下：
13. 按2:1的比例将本产品与mRNA溶液混合。注意：微量核酸沉淀剂取用前需要摇匀。
14. 室温15000 g离心10分钟(如果核酸含量在2 ng以下，建议离心30分钟)。
15. 弃上清后加75%乙醇1 mL，振荡混匀。
16. 15000 离心3-5分钟，弃上清。
17. 再短暂离心后小心吸弃上清，沉淀即为回收的mRNA沉淀，可溶于RNase-free水中。