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BTN80901 大提柱式动物RNA提取试剂盒
发布时间：2017-09-30 20:59 | 点击次数：230
大提柱式动物RNA提取试剂盒说明书
产品编号：BTN80901
规格：5T
产品及特点：
本产品是柱式动物RNA提取试剂盒（BTN71201）的大提升级产品，可用于从各种动物组织（包括白细胞）中大规模快速提取总RNA。跟柱式动物RNA提取试剂盒相比，其主要特点是：
1. 大规模提取，一次最大可以提取到80-100 μg 的动物总RNA。
2. 操作简单快速，整个过程只需要不到二十分钟（对一个样品而言）。
3. RNA 纯度更高，OD260/OD280 一般在2.0 左右。
4. 一般不含用电泳可以检测到的基因组DNA污染。
5. 适用于培养细胞、大部分动物组织和部分植物组织。
6. 得到的RNA 可直接用于RT-PCR、Northern 杂交、cDNA合成等实验。
规格及成分：
保存条件：
常温运输，4℃保存，有效期一年。
自备试剂：
氯仿。
使用方法：
1. 先将1-2 g 左右剪切好的动物组织放入50 mL 塑料离心管中，加10 mL溶液A，用匀浆器匀浆30 秒左右。对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织（细胞中含大量正在复制的DNA），建议组织的使用量不要超过50 mg/mL 裂解液，否则十分容易产生DNA 污染。
2. 加入0.2 倍体积的自备氯仿（10 mL 溶液A 需2 ml 氯仿），振荡器上充分振荡混均30 秒。
3. 5000-7000 rpm 室温离心3-5 分钟。
4. 将上清液（约6-7 mL 的无色透明水相，有时水相比重大时，水相在下层，有机相即蓝相在上层，吸取时应吸取透明水相）转移到一个干净的50 mL塑料离心管中。注意：离心后下层有机相和中间层含有DNA 和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA 污染。为保险起见，可以留下少许上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的丝状DNA。
5. 加入等体积的溶液B，充分颠倒混匀。加入溶液B 后，溶液为乳白色。
6. 将溶液转移到离心吸附柱中，5000-7000 rpm 室温离心1 分钟，弃穿透液。
7. 加10 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心1 分钟，弃收集管中的穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。
8. 加10 mL 通用洗柱液，室温离心1 分钟，弃穿透液。此步可以省略。
9. 室温5000-7000 rpm 离心2 分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA 的使用。
10. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 收集管中，加入1 mL RNA 洗脱液。
11. 室温5000-7000 rpm 离心2 分钟，离心管中溶液即为RNA 样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
12. 重复10-11 步一次，大提离心吸附柱吸附能力较强，一般第二次洗脱能洗脱较第一次洗脱更多的RNA。
13. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做Northern 杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA 电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子（BioTechniques，28：414，2000）。
14. RNA 产量产率测定：将5-10 μL RNA 溶于TE 缓冲液中（pH 在7.5-8.2之间）检测其在OD260 的光吸收。通过光吸收可以得出RNA 浓度（1OD260 RNA=40 μg/mL），进而计算出RNA 的产量（浓度×体积）和产率（RNA 产量/组织用量）。
15. RNA 纯度测定：无污染的总RNA 的OD260/OD280 一般在1.8-2.1 之间（具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关），高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR 等反应。
疑难解答：
Q：上样孔里的红色荧光物一定是DNA 污染吗？
A：不是。用TAE 或TBE 电泳液和非变性胶电泳RNA 时容易产生此现象，初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA通过碱基互补或通过硼酸络合（如果使用TBE 作电泳液的话）形成的复合物，加RNase处理后，这些红色荧光物（RNA）一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳和RNA专用上样液（如RNA上样液）。
Q：如何确认和去处除污染的基因组DNA？
A：如果怀疑有DNA 污染，可以用RNase 处理RNA 样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组DNA 污染。进一步确认可以使用PCR 扩增法。去除污染的DNA 可以使用非酶的DNA去除剂DNA Erasol 或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase 一般都有残留的RNase 污染，所以必须严格按照厂家提供的使用说明书进行操作。
产品编号：BTN80901
规格：5T
产品及特点：
本产品是柱式动物RNA提取试剂盒（BTN71201）的大提升级产品，可用于从各种动物组织（包括白细胞）中大规模快速提取总RNA。跟柱式动物RNA提取试剂盒相比，其主要特点是：
1. 大规模提取，一次最大可以提取到80-100 μg 的动物总RNA。
2. 操作简单快速，整个过程只需要不到二十分钟（对一个样品而言）。
3. RNA 纯度更高，OD260/OD280 一般在2.0 左右。
4. 一般不含用电泳可以检测到的基因组DNA污染。
5. 适用于培养细胞、大部分动物组织和部分植物组织。
6. 得到的RNA 可直接用于RT-PCR、Northern 杂交、cDNA合成等实验。
规格及成分：
| 成分 | 5T |
| 溶液A | 50ml |
| 溶液B | 50ml |
| 离心吸附柱 | 5套 |
| 通用洗柱液 | 100ml |
| RNA 洗脱液 | 10ml |
| 说明书 | 1份 |
常温运输，4℃保存，有效期一年。
自备试剂：
氯仿。
使用方法：
1. 先将1-2 g 左右剪切好的动物组织放入50 mL 塑料离心管中，加10 mL溶液A，用匀浆器匀浆30 秒左右。对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织（细胞中含大量正在复制的DNA），建议组织的使用量不要超过50 mg/mL 裂解液，否则十分容易产生DNA 污染。
2. 加入0.2 倍体积的自备氯仿（10 mL 溶液A 需2 ml 氯仿），振荡器上充分振荡混均30 秒。
3. 5000-7000 rpm 室温离心3-5 分钟。
4. 将上清液（约6-7 mL 的无色透明水相，有时水相比重大时，水相在下层，有机相即蓝相在上层，吸取时应吸取透明水相）转移到一个干净的50 mL塑料离心管中。注意：离心后下层有机相和中间层含有DNA 和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA 污染。为保险起见，可以留下少许上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的丝状DNA。
5. 加入等体积的溶液B，充分颠倒混匀。加入溶液B 后，溶液为乳白色。
6. 将溶液转移到离心吸附柱中，5000-7000 rpm 室温离心1 分钟，弃穿透液。
7. 加10 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心1 分钟，弃收集管中的穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。
8. 加10 mL 通用洗柱液，室温离心1 分钟，弃穿透液。此步可以省略。
9. 室温5000-7000 rpm 离心2 分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA 的使用。
10. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 收集管中，加入1 mL RNA 洗脱液。
11. 室温5000-7000 rpm 离心2 分钟，离心管中溶液即为RNA 样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
12. 重复10-11 步一次，大提离心吸附柱吸附能力较强，一般第二次洗脱能洗脱较第一次洗脱更多的RNA。
13. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做Northern 杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA 电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子（BioTechniques，28：414，2000）。
14. RNA 产量产率测定：将5-10 μL RNA 溶于TE 缓冲液中（pH 在7.5-8.2之间）检测其在OD260 的光吸收。通过光吸收可以得出RNA 浓度（1OD260 RNA=40 μg/mL），进而计算出RNA 的产量（浓度×体积）和产率（RNA 产量/组织用量）。
15. RNA 纯度测定：无污染的总RNA 的OD260/OD280 一般在1.8-2.1 之间（具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关），高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR 等反应。
疑难解答：
Q：上样孔里的红色荧光物一定是DNA 污染吗？
A：不是。用TAE 或TBE 电泳液和非变性胶电泳RNA 时容易产生此现象，初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA通过碱基互补或通过硼酸络合（如果使用TBE 作电泳液的话）形成的复合物，加RNase处理后，这些红色荧光物（RNA）一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳和RNA专用上样液（如RNA上样液）。
Q：如何确认和去处除污染的基因组DNA？
A：如果怀疑有DNA 污染，可以用RNase 处理RNA 样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组DNA 污染。进一步确认可以使用PCR 扩增法。去除污染的DNA 可以使用非酶的DNA去除剂DNA Erasol 或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase 一般都有残留的RNase 污染，所以必须严格按照厂家提供的使用说明书进行操作。