BTN80902 大提柱式血液RNA提取试剂盒

大提柱式血液RNA提取试剂盒说明书
产品编号：BTN80902
规格：5T
产品及特点：
本产品是在柱式血液RNA提取试剂盒（BTN71202）基础上开发的大提升级产品，专门从动物全血样品中快速提取总RNA。跟柱式血液RNA提取试剂盒相比，本产品具有下列特点：
1. 大量提取，每次最多可处理 30mL血液。
2. 操作简单快捷，直接使用新鲜的或冷冻的抗凝全血样品，不需要裂解红细胞等任何预处理步骤，整个提取过程只需要十分钟左右，可以全在室温下进行。
3. 纯度高，OD260/OD280 均在2.0 左右，得到的RNA 可以直接用于RT-PCR 和Northern 杂交等研究。
4. 产率一般为 2-5μg/mL人血。
5. 与常用的抗凝剂（包括肝素，EDTA，柠檬酸钠，草酸钠）兼容。
规格及成分：

成分	规格
溶液A	100ml
溶液B	30ml
溶液C	100ml
大提离心吸附柱	5套
通用洗柱液	100ml
RNA洗脱液	10ml
说明书	1份

保存条件：
常温运输，4℃保存，有效期一年。
自备试剂：
氯仿。
使用方法：
1. 将 10-30 mL 新鲜或解冻后的抗凝全血加入到50 mL 塑料离心管中。
2. 12000-15000 g 室温离心5 分钟，弃上清(血浆)。
3. 将 20 mL 溶液A 加入到血液细胞沉淀中，用移液枪吹打沉淀使细胞裂解。
4. 将 6 mL 的溶液B 和4 mL 氯仿加入到离心管中，剧烈震荡30 秒。
5. 12000-15000 g 室温离心3-5 分钟，将上清液(为无色或浅红色)转移到另一干净离心管中。注意：转移的液体不要超过25 mL，否则下一步不能加入等体积的溶液C。为防止污染，最好留少量上清液。下层有机相一般呈深红色，中间层为白色，含有DNA，蛋白质和其他细胞破碎物，避免触及或吸取。
6. 加入等体积的溶液 C，充分颠倒混匀。
7. 分两次将溶液转移到离心吸附柱中，每次转移后12000-15000 g 室温离心半分钟，弃穿透液。
8. 加 25 mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。
9. 重复步骤 8 一次。
10. 室温 12000-15000 g 离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA 的后续反应。
11. 将离心吸附柱转移到一个新的离心管中，加入1mL RNA 洗脱液，室温放置1-2 分钟。
12. 12000-15000 g 室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA 样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
13. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做Northern 杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA 电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA 分子（BioTechniques，28：414，2000）。
14. RNA 产量产率测定：将5-10μL RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度（1 OD260的RNA=40 μg/mL），进而计算出RNA 的产量（浓度X 体积)和产率(RNA产量/组织用量)。人血RNA 产率一般为2-5 μg/mL。
15. RNA 纯度测定：无污染的总RNA 的OD260/OD280 一般在2.0 左右(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR 等反应。
疑难解答：
Q: 如何去除RNA 样品中的DNA 污染？
A: 可以使用百奥莱博的非酶DNA 清除剂DNA ERASOL-2。
Q: 为何有的样品在第6 步离心后有很厚的中间层，上清很少。
A: 这是因为蛋白质变性不充分，可以适当减少血液的用量。白细胞多的血液容易产生这种情况。