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BTN80905 大提柱式细菌RNA提取试剂盒
发布时间：2017-09-30 21:00 | 点击次数：178
大提柱式细菌RNA提取试剂盒说明书
产品编号：BTN80905
规格：5T
产品及特点：
本产品是在本公司柱式细菌RNA提取试剂盒(BTN80103)基础上开发的大提升级产品，用于快速从各种常见的革氏阴性和革氏阳性细菌中大量提取总RNA。
跟柱式细菌 RNAout 相比，它具有下列特点:
1. 单次样品处理量大，最多可以处理 30 mL细菌培养物。
2. 操作简单快速，一次提取只需要 20分钟左右。
3. 所得 RNA 纯度高，OD260/OD280 一般在2.0左右。一般不含基因DNA污染。
4. 适用于各种革氏阴性和革氏阳性细菌。
规格及成分：
保存条件：
常温运输，4℃保存，有效期一年。
自备试剂：
氯仿。
使用方法：
下面的操作步骤是针对在 50 mL 塑料离心管中进行的大量提取的。
1. 在 50 mL 塑料离心管中离心收集 10-30mL新鲜细菌。注意:由于细菌RNA 半衰期十分短，所以，必须使用最新鲜的、处于对数生长期的细菌。
2. 吸尽液体培养基，加入 10 mL溶液A，用枪充分吹打细菌沉淀，确保细菌全部裂解，没有块状物。
3. 加入 0.2 倍体积的自备氯仿(10 mL溶液A需2 ml氯仿)，振荡器上充分振荡混均 30 秒。
4. 5000-7000 rmp 室温离心 3-5 分钟。
5. 将上清液（约 5-6 mL 的无色透明水相，有时水相比重大时，水相在下层，有机相即蓝相在上层，吸取时应吸取透明水相）转移到一个干净的 50 mL塑料离心管中。注意：离心后下层有机相和中间层含有 DNA 和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和 DNA 污染。为保险起见，可以留下少许上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的丝状 DNA。
6. 加入等体积的溶液 B，充分颠倒混匀。加入溶液 B 后，溶液为乳白色。
7. 将溶液转移到离心吸附柱中，5000-7000 rpm 室温离心 1 分钟，弃穿透液。
8. 加 10 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心 1 分钟，弃收集管中的穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。
9. 加 10 mL 通用洗柱液，室温离心 1 分钟，弃穿透液。此步可以省略。
10. 室温 5000-7000 rpm 离心 2 分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响 RNA 的使用。
11. 加入 1 mL 通用预洗脱液，5000-7000 rpm 离心 1 分钟。
12. 将离心吸附柱转移到一自备的 RNase-free 收集管中，加入 1 mL RNA 洗脱液。
13. 室温 5000-7000 rpm 离心 2 分钟，离心管中溶液即为 RNA 样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
14. 重复 14-15 步一次，我司的大提离心吸附柱吸附能力较强，一般第二次洗脱还能洗脱较多的 RNA。
15. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做 Northern 杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行 RNA 电泳，因为非变性胶不能分离所有的 RNA 分子（BioTechniques，28：414，2000）。
16. RNA 产量产率测定：将 5-10μL RNA 溶于 TE 缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在 OD260 的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA 浓度（1 OD260的 RNA=40 μg/mL），进而计算出 RNA 的产量（浓度×体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
17. RNA 纯度测定：无污染的总 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响 RT-PCR 等反应。
疑难解答：
Q：上样孔里的红色荧光物一定是DNA污染吗？
A：不是。用 TAE 或 TBE 电泳液和非变性胶电泳 RNA 时容易产生此现象，初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链 RNA 通过碱基互补或通过硼酸络合（如果使用 TBE 作电泳液的话）形成的复合物，加RNase 处理后，这些红色荧光物(RNA)一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳和 RNA 专用上样液(如百奥莱博的 RNAon)。
产品编号：BTN80905
规格：5T
产品及特点：
本产品是在本公司柱式细菌RNA提取试剂盒(BTN80103)基础上开发的大提升级产品，用于快速从各种常见的革氏阴性和革氏阳性细菌中大量提取总RNA。
跟柱式细菌 RNAout 相比，它具有下列特点:
1. 单次样品处理量大，最多可以处理 30 mL细菌培养物。
2. 操作简单快速，一次提取只需要 20分钟左右。
3. 所得 RNA 纯度高，OD260/OD280 一般在2.0左右。一般不含基因DNA污染。
4. 适用于各种革氏阴性和革氏阳性细菌。
规格及成分：
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 50ml |
| 溶液 B | 50ml |
| 大提离心吸附柱 | 5套 |
| 通用洗柱液 | 100ml |
| 通用预洗脱液 | 5ml |
| RNA洗脱液 | 10ml |
| 说明书 | 1份 |
常温运输，4℃保存，有效期一年。
自备试剂：
氯仿。
使用方法：
下面的操作步骤是针对在 50 mL 塑料离心管中进行的大量提取的。
1. 在 50 mL 塑料离心管中离心收集 10-30mL新鲜细菌。注意:由于细菌RNA 半衰期十分短，所以，必须使用最新鲜的、处于对数生长期的细菌。
2. 吸尽液体培养基，加入 10 mL溶液A，用枪充分吹打细菌沉淀，确保细菌全部裂解，没有块状物。
3. 加入 0.2 倍体积的自备氯仿(10 mL溶液A需2 ml氯仿)，振荡器上充分振荡混均 30 秒。
4. 5000-7000 rmp 室温离心 3-5 分钟。
5. 将上清液（约 5-6 mL 的无色透明水相，有时水相比重大时，水相在下层，有机相即蓝相在上层，吸取时应吸取透明水相）转移到一个干净的 50 mL塑料离心管中。注意：离心后下层有机相和中间层含有 DNA 和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和 DNA 污染。为保险起见，可以留下少许上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的丝状 DNA。
6. 加入等体积的溶液 B，充分颠倒混匀。加入溶液 B 后，溶液为乳白色。
7. 将溶液转移到离心吸附柱中，5000-7000 rpm 室温离心 1 分钟，弃穿透液。
8. 加 10 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心 1 分钟，弃收集管中的穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。
9. 加 10 mL 通用洗柱液，室温离心 1 分钟，弃穿透液。此步可以省略。
10. 室温 5000-7000 rpm 离心 2 分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响 RNA 的使用。
11. 加入 1 mL 通用预洗脱液，5000-7000 rpm 离心 1 分钟。
12. 将离心吸附柱转移到一自备的 RNase-free 收集管中，加入 1 mL RNA 洗脱液。
13. 室温 5000-7000 rpm 离心 2 分钟，离心管中溶液即为 RNA 样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
14. 重复 14-15 步一次，我司的大提离心吸附柱吸附能力较强，一般第二次洗脱还能洗脱较多的 RNA。
15. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做 Northern 杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行 RNA 电泳，因为非变性胶不能分离所有的 RNA 分子（BioTechniques，28：414，2000）。
16. RNA 产量产率测定：将 5-10μL RNA 溶于 TE 缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在 OD260 的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA 浓度（1 OD260的 RNA=40 μg/mL），进而计算出 RNA 的产量（浓度×体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
17. RNA 纯度测定：无污染的总 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响 RT-PCR 等反应。
疑难解答：
Q：上样孔里的红色荧光物一定是DNA污染吗？
A：不是。用 TAE 或 TBE 电泳液和非变性胶电泳 RNA 时容易产生此现象，初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链 RNA 通过碱基互补或通过硼酸络合（如果使用 TBE 作电泳液的话）形成的复合物，加RNase 处理后，这些红色荧光物(RNA)一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳和 RNA 专用上样液(如百奥莱博的 RNAon)。