产品分类
公司新闻
BTN80906 一站式大提柱式miRNA提取试剂盒
发布时间：2017-09-30 21:01 | 点击次数：199
一站式大提柱式miRNA提取试剂盒说明书
产品编号：BTN80906
规格：5T
产品及特点：
本产品是本产品是在柱式miRNA提取试剂盒(BTN80104) 基础上自主开发的大提升级产品，是目前国内外市场上最快速最简单的小RNA分离纯化产品。它具有下列特点：
1. 样品处理量大，一次最多可以处理2g的样品。
2. 一步法直接分离纯化小RNA，比Ambion的两步法和PAGE 电泳回收法更简单。整个过程只需要二十多分钟。
3. 得到的小RNA 长度大部分在200 nt 以下，包括 5S RNA、tRNA、miRNA、Pre-miRNA、pri-miRNA、siRNA、shRNA 和 snRNA 等。
4. 小 RNA 纯净，OD260/280一般都在1.9 以上。无基因组DNA的污染。可用于 RT-PCR、miRNA 标记、microarray 等后续实验。
5. 产率一般为20-40μg/100mg动物组织。
6. 适用范围广，可以用于动物组织、血液及部分植物组织等实验材料。
规格及成分：
保存条件：
常温运输，4℃保存，有效期一年。
自备试剂：
氯仿。
使用方法：
由于离心吸附柱的吸附量限制，本产品每次提取只能处理2 g 左右的各种组织，可以在50 mL 塑料离心管中操作。
1. 新鲜配制裂解液20 mL。将溶液A 和溶液B 按 1:1 的比例混合（即溶液A 和溶液B 各10 mL），然后根据组织细胞类型的不同分为下面几种情况使用。注意：溶液A 和溶液B 混合后必须立即使用，不要放置，否则会产生沉淀。如果产生沉淀，需加热到65℃使其溶解后才能使用。
a) 对贴壁细胞：吸尽培养液，按每10 平方厘米细胞中加入1 mL 新鲜配制的裂解液，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解。
b) 对悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，按每 1-5×106悬浮细胞中加入1 mL 新鲜配制的裂解液，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解。如果是fibroblasts 或carcinoma cell，1 mL 新鲜配制的裂解液的细胞使用量不要超过1×106个细胞。
c) 对新鲜的动物组织：先将剪切成小块新鲜组织或液氮保存的组织放入50 mL 塑料离心管中，每克组织加10 mL 新鲜配制的裂解液，用匀浆器匀浆30 秒左右。对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织（细胞中含大量正在复制的DNA），建议组织的使用量不要超过50mg/ mL 裂解液，否则十分容易产生DNA 污染。
d) 对新鲜的植物组织：先将剪切成小块新鲜组织或液氮保存的组织放入50 mL 塑料离心管中，每50-100 mg 组织加1 mL 新鲜配制的裂解液，用匀浆器匀浆30 秒左右。
e) 对 RNALOCKER 保存动物或植物组织：先用纸吸去RNALOCKER 液体后再剪切成小块，放入50 mL 塑料离心管中，每50-100 mg 组织加1 mL 新鲜配制的裂解液，用匀浆器匀浆30 秒左右。
2. 将裂解物转移至一个干净的50 mL 塑料离心管中，然后加入0.2-0.3 倍体积的自备氯仿（1 mL 裂解物需0.2-0.3 mL 氯仿），振荡器上充分振荡混均30 秒。
3. 12000-15000 g 室温离心3-5 分钟。
4. 将上清液（约12-16 mL）转移到一个离心吸附柱（大提）中以去除大RNA。注意：离心后下层有机相和中间层含有DNA 和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA 污染。为保险起见，可以留下部分上清液不取。
同 时吸取上清时最好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的丝状DNA。本试剂盒提供的离心吸附柱（大提）之间没任何区别，可以随机选一个做大RNA 吸附，另一个做小RNA 吸附。
5. 12000-15000 g 室温离心离心吸附柱（大提）1 分钟，收集管中的穿透液。大RNA 将与离心吸附柱的膜结合，小RNA 将存在于穿透液中。如果需要回收大RNA，请按附录的方法操作，但需要单独购买本公司的通用洗柱液和RNA 洗脱液。
6. 在穿透液中加等体积的溶液C，混匀。此时溶液的总体积约30 mL。
7. 分一次或分两次将混合液转移到新的离心吸附柱（大提）中，每次转移后需要12000-15000 g 室温离心1 分钟，弃收集管中的穿透液。
注意：不要使用已经使用过的、用来吸附大RNA 的离心吸附柱（大提）。
8. 加 10 mL 通用洗柱液到离心吸附柱（大提）中，12000-15000 g 室温离心1 分钟，弃穿透液。
9. 加 10 mL 通用洗柱液到离心吸附柱（大提）中，12000-15000 g 室温离心半分钟，弃穿透液。
10. 12000-15000 g 室温离心1 分钟以甩出残留液体。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响 miRNA 的使用。
11. 将离心吸附柱（大提）转移到一自备的、50 mL RNase-free 收集管中，加入0.5-1 mL RNA 洗脱液。
12. 12000-15000 g 室温离心1 分钟，离心管中收集的溶液即为miRNA 样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
附录：
1. 用 10 mL 自备的通用洗柱液洗涤结合有大RNA 的离心吸附柱（大提）。
2. 重复上步一次。
3. 干甩一次。
4. 加入 0.5-1 mL RNA 洗脱液，室温放置2-3 分钟。
5. 12000-15000 g 室温离心1 分钟，离心管中收集的溶液即为大RNA 样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
产品编号：BTN80906
规格：5T
产品及特点：
本产品是本产品是在柱式miRNA提取试剂盒(BTN80104) 基础上自主开发的大提升级产品，是目前国内外市场上最快速最简单的小RNA分离纯化产品。它具有下列特点：
1. 样品处理量大，一次最多可以处理2g的样品。
2. 一步法直接分离纯化小RNA，比Ambion的两步法和PAGE 电泳回收法更简单。整个过程只需要二十多分钟。
3. 得到的小RNA 长度大部分在200 nt 以下，包括 5S RNA、tRNA、miRNA、Pre-miRNA、pri-miRNA、siRNA、shRNA 和 snRNA 等。
4. 小 RNA 纯净，OD260/280一般都在1.9 以上。无基因组DNA的污染。可用于 RT-PCR、miRNA 标记、microarray 等后续实验。
5. 产率一般为20-40μg/100mg动物组织。
6. 适用范围广，可以用于动物组织、血液及部分植物组织等实验材料。
规格及成分：
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 50ml |
| 溶液B | 50ml |
| 溶液C | 100ml |
| 离心吸附柱（大提） | 10套 |
| 通用洗柱液 | 100ml |
| RNA洗脱液 | 5ml |
| 说明书 | 1份 |
常温运输，4℃保存，有效期一年。
自备试剂：
氯仿。
使用方法：
由于离心吸附柱的吸附量限制，本产品每次提取只能处理2 g 左右的各种组织，可以在50 mL 塑料离心管中操作。
1. 新鲜配制裂解液20 mL。将溶液A 和溶液B 按 1:1 的比例混合（即溶液A 和溶液B 各10 mL），然后根据组织细胞类型的不同分为下面几种情况使用。注意：溶液A 和溶液B 混合后必须立即使用，不要放置，否则会产生沉淀。如果产生沉淀，需加热到65℃使其溶解后才能使用。
a) 对贴壁细胞：吸尽培养液，按每10 平方厘米细胞中加入1 mL 新鲜配制的裂解液，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解。
b) 对悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，按每 1-5×106悬浮细胞中加入1 mL 新鲜配制的裂解液，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解。如果是fibroblasts 或carcinoma cell，1 mL 新鲜配制的裂解液的细胞使用量不要超过1×106个细胞。
c) 对新鲜的动物组织：先将剪切成小块新鲜组织或液氮保存的组织放入50 mL 塑料离心管中，每克组织加10 mL 新鲜配制的裂解液，用匀浆器匀浆30 秒左右。对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织（细胞中含大量正在复制的DNA），建议组织的使用量不要超过50mg/ mL 裂解液，否则十分容易产生DNA 污染。
d) 对新鲜的植物组织：先将剪切成小块新鲜组织或液氮保存的组织放入50 mL 塑料离心管中，每50-100 mg 组织加1 mL 新鲜配制的裂解液，用匀浆器匀浆30 秒左右。
e) 对 RNALOCKER 保存动物或植物组织：先用纸吸去RNALOCKER 液体后再剪切成小块，放入50 mL 塑料离心管中，每50-100 mg 组织加1 mL 新鲜配制的裂解液，用匀浆器匀浆30 秒左右。
2. 将裂解物转移至一个干净的50 mL 塑料离心管中，然后加入0.2-0.3 倍体积的自备氯仿（1 mL 裂解物需0.2-0.3 mL 氯仿），振荡器上充分振荡混均30 秒。
3. 12000-15000 g 室温离心3-5 分钟。
4. 将上清液（约12-16 mL）转移到一个离心吸附柱（大提）中以去除大RNA。注意：离心后下层有机相和中间层含有DNA 和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA 污染。为保险起见，可以留下部分上清液不取。
同 时吸取上清时最好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的丝状DNA。本试剂盒提供的离心吸附柱（大提）之间没任何区别，可以随机选一个做大RNA 吸附，另一个做小RNA 吸附。
5. 12000-15000 g 室温离心离心吸附柱（大提）1 分钟，收集管中的穿透液。大RNA 将与离心吸附柱的膜结合，小RNA 将存在于穿透液中。如果需要回收大RNA，请按附录的方法操作，但需要单独购买本公司的通用洗柱液和RNA 洗脱液。
6. 在穿透液中加等体积的溶液C，混匀。此时溶液的总体积约30 mL。
7. 分一次或分两次将混合液转移到新的离心吸附柱（大提）中，每次转移后需要12000-15000 g 室温离心1 分钟，弃收集管中的穿透液。
注意：不要使用已经使用过的、用来吸附大RNA 的离心吸附柱（大提）。
8. 加 10 mL 通用洗柱液到离心吸附柱（大提）中，12000-15000 g 室温离心1 分钟，弃穿透液。
9. 加 10 mL 通用洗柱液到离心吸附柱（大提）中，12000-15000 g 室温离心半分钟，弃穿透液。
10. 12000-15000 g 室温离心1 分钟以甩出残留液体。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响 miRNA 的使用。
11. 将离心吸附柱（大提）转移到一自备的、50 mL RNase-free 收集管中，加入0.5-1 mL RNA 洗脱液。
12. 12000-15000 g 室温离心1 分钟，离心管中收集的溶液即为miRNA 样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
附录：
1. 用 10 mL 自备的通用洗柱液洗涤结合有大RNA 的离心吸附柱（大提）。
2. 重复上步一次。
3. 干甩一次。
4. 加入 0.5-1 mL RNA 洗脱液，室温放置2-3 分钟。
5. 12000-15000 g 室温离心1 分钟，离心管中收集的溶液即为大RNA 样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。