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BTN80912 大提柱式质粒DNA提取试剂盒
发布时间：2017-09-30 21:01 | 点击次数：368
大提柱式质粒DNA提取试剂盒说明书
产品编号：BTN80912
规格：5T/10T
产品及特点：
本试剂盒是用于质粒DNA 大量制备与纯化的试剂盒。菌体先经碱裂解法处理，再通过离心吸附柱，专一结合DNA，最后洗去杂质，高效快速提取质粒DNA，全套操作可以在30 分钟之内完成。使用本试剂盒可从50-100 mL 过夜培养的菌液纯化得到高达300-500 ug的高纯度质粒DNA（OD260/OD280= 1.8-2.0），可以直接用于酶切、转化、测序及PCR 等。
1． 快速、步骤少，整个操作在半个小时之内完成。
2． 纯度高，采用本试剂盒提取的质粒OD 比值在1.8-2.0 之间。
3． 产量高，每毫升过夜培养的细菌可以提取到2-5 ug/mL。
4． 用途广，适用于低拷贝和高拷贝质粒。
5． 价格低，比多数国内同类产品的价格更便宜。
规格及成分：
保存条件：
RNase A溶液需-20℃保存，其余成分可室温或4℃保存，如有沉淀可加热溶解后再使用。
使用方法：
1. 用250 mL 离心管收集100-300 mL 菌液，5000 rpm 离心10 分钟，去除上清。
2. 往细菌沉淀中加入6 mL 溶液A，充分振荡悬浮（第一次使用时需要将RNase A 溶液全部加入到溶液A 中并混合均匀，未用完的、含RNase A的溶液A 需放4℃保存）。注意：充分重悬细胞沉淀使之无细胞结块状物对于获得高的质粒产量十分重要。
3. 加入6 mL 溶液B，温和翻转10 余次至透明。若混合液不透明，应减少细菌的用量或室温放置5-10分钟直到裂解液变透明。注意: 避免剧烈振荡，否则细菌基因组DNA 将断裂为小片段，与质粒难以分离，污染质粒DNA。
4. 加入冰浴的8 mL 溶液C，颠倒混匀，冰上放置10分钟。混合物中将有白色絮状物形成。注意不要过分振荡。
5. 6000 rpm 离心10 分钟。如果离心管承受能力强，离心速度还可以适当提高以充分沉淀絮状物。
6. 将上清液（约20 mL）转移到离心吸附柱中，放入50 mL 套管中。
7. 6000 rpm 离心5 分钟，质粒DNA 将与离心吸附柱中的膜结合。弃穿透液。
8. 将10 mL 通用洗柱液加入到离心吸附柱中，室温静置2 分钟后6000 rpm离心5 分钟，弃穿透液。
9. 重复上步一次，即将10 mL 通用洗柱液加入到离心吸附柱中，室温静置2分钟后6000 rpm 离心5 分钟，弃穿透液。
10. 室温6000 rpm 空甩5 分钟，弃穿透液。注意：此步对去除残留通用洗柱液很重要，否则通用洗柱液会影响DNA 的使用。
11. 将离心吸附柱放入一个自备的、干净的50 mL 塑料离心管中，加1 mL DNA洗脱液2.0（洗脱液如加热到50-65℃效果更佳），室温静置2 分钟后6000rpm 离心5 分钟，收集液即是质粒DNA 溶液。
12. 本试剂盒中的离心吸附柱吸附能力较强，所以再用1 mL DNA 洗脱液2.0洗脱3-4 次才能把绝大部分质粒DNA 洗脱下来。得到的RNA 可以收集在一起立即使用或存放于-80℃待用。注：如果DNA 洗脱液不够，可以用自备的DEPC 水代替。
注：一般情况下，第一次洗脱可以洗脱约25%的质粒DNA；第二次洗脱可以洗脱约35%的质粒DNA；第三次洗脱可以洗脱约20%的质粒DNA；第四次洗脱可以洗脱约10%的质粒DNA；第五次洗脱可以洗脱约8%的质粒DNA。
1．细菌培养时间一般为12-16 小时，但接种量大时应减少时间。过度培养会降低质粒的质量甚至导致质粒DNA 突变。
2．溶液A：溶液B：溶液C 的比例为3：3：4。若细菌量增大，需按此比例放大这些溶液的使用量。
3．随菌体增多应延长溶液B 的作用时间，直至溶液成粘稠透明状。但时间过长会导致质粒DNA 变性。
4．加溶液C 后形成的白色沉淀中有变性的蛋白质、细菌基因组DNA 和细胞碎片，离心后应避免带入到后续处理中。
5．通用洗柱液洗涤离心柱后必须甩干一次，否则残留通用洗柱液中的乙醇会干扰后续实验。
6．质粒的具体产量跟细菌量、质粒拷贝数、质粒大小和操作规范程度密切相关。100 mL 高拷贝的菌液一般能得到700-1500ug质粒DNA，100mL低拷贝的菌液一般能得到150-350ug质粒DNA。
7．纯化的质粒在电泳中表现为2-3 条带有时甚至为4-6 条带均属正常，未分开的环套质粒，易被误判为基因组DNA。
产品编号：BTN80912
规格：5T/10T
产品及特点：
本试剂盒是用于质粒DNA 大量制备与纯化的试剂盒。菌体先经碱裂解法处理，再通过离心吸附柱，专一结合DNA，最后洗去杂质，高效快速提取质粒DNA，全套操作可以在30 分钟之内完成。使用本试剂盒可从50-100 mL 过夜培养的菌液纯化得到高达300-500 ug的高纯度质粒DNA（OD260/OD280= 1.8-2.0），可以直接用于酶切、转化、测序及PCR 等。
1． 快速、步骤少，整个操作在半个小时之内完成。
2． 纯度高，采用本试剂盒提取的质粒OD 比值在1.8-2.0 之间。
3． 产量高，每毫升过夜培养的细菌可以提取到2-5 ug/mL。
4． 用途广，适用于低拷贝和高拷贝质粒。
5． 价格低，比多数国内同类产品的价格更便宜。
规格及成分：
| 成分 | 5T | 10T |
| 溶液A | 30ml | 60ml |
| 溶液B | 30ml | 60ml |
| RNase A溶液(10mg/mL) | 0.15ml | 0.3ml |
| 溶液C | 40ml | 80ml |
| 大提离心吸附柱 | 5套 | 10套 |
| 通用洗柱液 | 100ml | 200ml |
| DNA洗脱液2.0 | 10ml×2 | 50ml |
| 说明书 | 1份 | 1份 |
RNase A溶液需-20℃保存，其余成分可室温或4℃保存，如有沉淀可加热溶解后再使用。
使用方法：
1. 用250 mL 离心管收集100-300 mL 菌液，5000 rpm 离心10 分钟，去除上清。
2. 往细菌沉淀中加入6 mL 溶液A，充分振荡悬浮（第一次使用时需要将RNase A 溶液全部加入到溶液A 中并混合均匀，未用完的、含RNase A的溶液A 需放4℃保存）。注意：充分重悬细胞沉淀使之无细胞结块状物对于获得高的质粒产量十分重要。
3. 加入6 mL 溶液B，温和翻转10 余次至透明。若混合液不透明，应减少细菌的用量或室温放置5-10分钟直到裂解液变透明。注意: 避免剧烈振荡，否则细菌基因组DNA 将断裂为小片段，与质粒难以分离，污染质粒DNA。
4. 加入冰浴的8 mL 溶液C，颠倒混匀，冰上放置10分钟。混合物中将有白色絮状物形成。注意不要过分振荡。
5. 6000 rpm 离心10 分钟。如果离心管承受能力强，离心速度还可以适当提高以充分沉淀絮状物。
6. 将上清液（约20 mL）转移到离心吸附柱中，放入50 mL 套管中。
7. 6000 rpm 离心5 分钟，质粒DNA 将与离心吸附柱中的膜结合。弃穿透液。
8. 将10 mL 通用洗柱液加入到离心吸附柱中，室温静置2 分钟后6000 rpm离心5 分钟，弃穿透液。
9. 重复上步一次，即将10 mL 通用洗柱液加入到离心吸附柱中，室温静置2分钟后6000 rpm 离心5 分钟，弃穿透液。
10. 室温6000 rpm 空甩5 分钟，弃穿透液。注意：此步对去除残留通用洗柱液很重要，否则通用洗柱液会影响DNA 的使用。
11. 将离心吸附柱放入一个自备的、干净的50 mL 塑料离心管中，加1 mL DNA洗脱液2.0（洗脱液如加热到50-65℃效果更佳），室温静置2 分钟后6000rpm 离心5 分钟，收集液即是质粒DNA 溶液。
12. 本试剂盒中的离心吸附柱吸附能力较强，所以再用1 mL DNA 洗脱液2.0洗脱3-4 次才能把绝大部分质粒DNA 洗脱下来。得到的RNA 可以收集在一起立即使用或存放于-80℃待用。注：如果DNA 洗脱液不够，可以用自备的DEPC 水代替。
注：一般情况下，第一次洗脱可以洗脱约25%的质粒DNA；第二次洗脱可以洗脱约35%的质粒DNA；第三次洗脱可以洗脱约20%的质粒DNA；第四次洗脱可以洗脱约10%的质粒DNA；第五次洗脱可以洗脱约8%的质粒DNA。
- 合并所得质粒DNA，立即使用或-20℃储存。如果需要使用液相内毒素清除剂清除质粒DNA 中的内毒素，可以直接将此步所得的DNA 溶液用于去内毒素处理。如果DNA 浓度太低，可以另购本公司的核酸浓缩剂进行浓缩。
1．细菌培养时间一般为12-16 小时，但接种量大时应减少时间。过度培养会降低质粒的质量甚至导致质粒DNA 突变。
2．溶液A：溶液B：溶液C 的比例为3：3：4。若细菌量增大，需按此比例放大这些溶液的使用量。
3．随菌体增多应延长溶液B 的作用时间，直至溶液成粘稠透明状。但时间过长会导致质粒DNA 变性。
4．加溶液C 后形成的白色沉淀中有变性的蛋白质、细菌基因组DNA 和细胞碎片，离心后应避免带入到后续处理中。
5．通用洗柱液洗涤离心柱后必须甩干一次，否则残留通用洗柱液中的乙醇会干扰后续实验。
6．质粒的具体产量跟细菌量、质粒拷贝数、质粒大小和操作规范程度密切相关。100 mL 高拷贝的菌液一般能得到700-1500ug质粒DNA，100mL低拷贝的菌液一般能得到150-350ug质粒DNA。
7．纯化的质粒在电泳中表现为2-3 条带有时甚至为4-6 条带均属正常，未分开的环套质粒，易被误判为基因组DNA。