BTN170403 一管式反转录试剂盒(RT MIX)

一管式反转录试剂盒(RT MIX)说明书
产品编号：BTN170403
规格：10T
产品及特点：
本产品是一管式反转录预混Mix，内含反转录第一链合成所需的所有试剂（MMLV、Random primers、Oligo dT Primer、dNTP Mixture、反应Buffer 等），用户只需加入模板 RNA 和 RNase-Free 水即可进行反应。本产品特点如下：
1. cDNA 的合成更加方便，用户只需准备模板和水即可进行反应。
2. 快捷，操作步骤已经最大限度地简化，能减少污染，降低实验误差。
3. 效率高，特殊优化的oligo dT 和N6 随机引物配比，反转录效率高。
4. 速度快，只需42℃，20 分钟即可完成cDNA 第一链的合成。
5. 能够用于GC 含量高，二级结构复杂的RNA 模板，合成cDNA 片段长度可达12kb。
6. 兼容性好，合成的cDNA 可直接用于荧光定量PCR 反应，灵敏度高、稳定性好。
规格及成分：

成分	规格
2×RT MasterMix	0.1ml
RNase-Free 水	1ml
说明书	1份

保存条件：
低温运输，-20℃保存, 有效期一年。
自备试剂：
RNA 模板。
使用方法：
1. 解冻后颠倒轻弹混匀各组分，以20 uL 体系为例，按下表加入（2×RT Master Mix很粘稠，取用前请短暂离心，并避免吸头外壁沾附损失）：

2×RT MasterMix	10μl
Total RNA/mRNA 模板(自备)	50ng-2μg/5-200ng
补RNase-Free 水到	20μl

注意：对亍二级结构很复杂的RNA 模板，推荐使用变性步骤，即在操作步骤之前，将模板RNA 在65℃孵育5 分钟后迅速转移到冰上，再进行下一步操作。
2. 轻轻混匀，42℃孵育20 分钟进行反转录反应。
注意：对亍二级结构复杂或者GC 含量高的模板，可以提高温度至50℃，以增强反转录效率。
3. 85℃加热5 秒钟灭活反转录酶置冰上备用（更长时间保存请置于-20℃）。
注意事项：
1. 实验过程中请注意避免RNase污染，防止RNA降解或实验中的交叉污染。
2. 使用之前请完全溶解并充分混匀，以防因盐离子浓度丌均影响实验结果。
3. 使用后应尽快放回-20℃，避免反复冻融。
4. RNA模板的完整性对cDNA合成效率起着决定性作用，因此请选择可靠的RNA提取/纯化方法。
5. 如果扩增片段较长或者RNA结构复杂，为了加强转录效果，可以将RNA单独置于65-70℃加热 5-10分钟后再加入体系。
6. 操作人员请带口罩和一次性手套，并经常更换手套。