BTN80927 大提柱式细菌DNA提取试剂盒

大提柱式细菌DNA提取试剂盒说明书
产品编号：BTN80927
规格：4T（A）/4T（B）
产品及特点：
本产品在柱式真菌DNA提取试剂盒（BTN60802）基础上改良而得的大提升级产品，主要用于大量快速从各种革氏阳性和革氏阴性细菌材料中提取基因组DNA。跟柱式细菌DNAout 相比，它具有下列特点：
1. 处理量大，一次可以处理30mL 的饱和菌液。
2. 纯度高，OD260/280 一般在1.8 左右。不含污染和抑制剂，得到的DNA 可以不经稀释直接用于酶切、PCR、real-time PCR、mμLtiplex PCR、RAPD、RFLP、AFLP、Southern Blotting 等各种后续分子生物学实验。
3. 产率一般在5 ug/mL 细菌样品。离心吸附柱最大吸附量为200 ug。
4. DNA 片段长度一般在20-40 Kb 左右。
5. 适用范围广，适用于绝大多数常见的细菌材料等。
6. 本产品A 型不提供溶菌酶，适用于革氏阴性细菌；B 型提供溶菌酶，适用于革氏阳性细菌。
规格及成分：

成分	4T（A）	4T（B）
溶菌酶	无	5g
溶液A	25ml	25ml
溶液B	20ml	20ml
溶液C	100ml	100ml
大提离心吸附柱	4套	4套
通用洗柱液	100ml	100ml
DNA洗脱液	10ml	10ml
说明书	1份	1份

保存条件：
常温运输和保存（溶菌酶需要-20℃保存），有效期一年。
自备试剂：
氯仿、自备无菌水。
使用方法：
注意：溶液A和溶液B容易产生沉淀，溶液B十分粘稠，均需要放置在65℃预热使沉淀溶解、粘稠度降低，用前充分摇匀。
一: 对革氏阴性细菌样品
1. 将 30 mL 过夜培养的菌液转移到50 mL 塑料离心管中，5,000-7,000 rpm室温离心3 分钟沉淀细菌，弃上清。
2. 加入6 mL 预热的溶液A 到细菌沉淀中，充分吹打均匀。
3. 再加入 3 mL 预热的溶液B 到离心管中，颠倒数次混匀。此时溶液中可能有白色丝状悬浮物产生。
4. 65℃放置3-5 分钟。如果室温放置，DNA 产量会降低10-20%。
5. 加入 5 mL 自备氯仿，震荡混匀3 分钟，此时溶液将呈乳白色。
6. 5,000-7,000 rpm 室温离心5 分钟。此时上清液将变得透明，中间层有白膜。小心转移上清液到一个新的50mL塑料离心管中，避免触及中间层的白膜。
7. 加入 1.5 倍体积的溶液C，颠倒混匀后全部转移到离心吸附柱中，室温放置至少5 分钟。
8. 5,000-7,000 rpm 室温离心3 分钟，DNA 将吸附在离心吸附柱的膜上，倒弃收集管中的穿透液。
9. 将 10 mL 通用洗柱液加入离心柱中，5,000-7,000 rpm 室温离心1 分钟，弃穿透液。
10. 重复上步操作一次。
11. 空甩 1 分钟去除残留液体。
12. 将离心吸附柱转移到新的50 mL 离心管中，加1 mL 通用洗脱液（DNA 洗脱液），室温放置3-5 分钟，5,000-7,000 rpm 室温离心1 分钟即得DNA 溶液。
13. 由于本产品使用的离心吸附柱吸附DNA 的能力较强，可以重复上步操作一次以便得到更多的DNA。
14. 直接取5-10 μL 电泳检测DNA，其余放冰箱备用。
二: 对革氏阳性细菌样品
1. 将 30 mL 过夜培养的革氏阳性细菌5,000-7,000 rpm室温离心3 分钟后, 重悬于12 mL 溶菌液中（溶菌液配制:12 mL 无菌水+240 mg 溶菌酶)，颠倒混匀5-10 次后放37℃保温至少30 分钟(有的革氏阳性菌种可能需更长时间，需要自己根据不同的细菌摸索)。
2. 5,000-7,000 rpm rmp 室温离心10 分钟，小心弃上清。
3. 后续处理接上面的革氏阴性细菌提取步骤中的第2 步。