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BTN81025 双染细胞凋亡检测试剂盒
发布时间：2017-09-30 21:07 | 点击次数：423
双染细胞凋亡检测试剂盒说明书
产品编号：BTN81025
规格：25T/50T
产品及特点：
细胞凋亡是细胞的基本特征之一，它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面起着十分重要的作用。在细胞凋亡过程中，细胞内膜的磷酯酰丝氨酸外翻到细胞外膜，而Annexin V（膜联蛋白V）对其有天然的高亲和能力，故可以用FITC 标记（绿色荧光）的Annexin V 来检测细胞凋亡，但本方法的缺点是不能区分早期和晚期的凋亡细胞。早期和晚期的凋亡细胞的一个重要区别在于细胞膜的完整性（凋亡早期细胞没有丧失膜的完整性），故可以用碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）来染色加以区分。其原理图如下：
本产品就是整合了上述两种方法的高灵敏的细胞凋亡检测试剂盒，具下列特点：
1. 即开即用，不需要专门花时间准备各种成分。
2. 整合了Annexin V-FITC 和PI 检测法的优点，提高了凋亡细胞检测的灵敏度和特异性，本方法是目前最灵敏的细胞凋亡检测方法。
3. 跟流式细胞仪、荧光显微镜或其它荧光检测兼容。
4. 本产品适用于培养细胞（悬浮或贴壁），不适用于组织样品。
规格及成分：
保存条件：
常温运输，4℃保存，有效期半年。
自备试剂：
PBS、胰酶消化液（无EDTA）。
使用方法：
一: 收集悬浮细胞
1、对细胞进行细胞凋亡刺激后，1000 g 离心（1000-2000 rpm）离心5 分钟，弃上清，收集细胞。
2、用自备的PBS 洗涤细胞二次，最后用PBS 重悬细胞并计数。
3、取 1～5×105 细胞(1-5 万个细胞)，1000 g 离心（1000-2000 rpm）离心5 分钟，弃上清。
二: 收集贴壁细胞
4、吸出培养液到干净试管中后，用PBS 洗涤贴壁细胞一次。
5、用胰酶消化液（无EDTA）消化贴壁细胞。
6、迅速加入培养液终止消化反应。
7、将得到的细胞转移到离心管内，1000 g 离心（1000-2000 rpm）离心5分钟，弃上清，收集细胞。
8、用自备的PBS 洗涤细胞二次，最后用PBS 重悬细胞并计数。
9、取 1～5×105 细胞(1-5 万个细胞)，1000 g 离心（1000-2000 rpm）离心5 分钟，弃上清。
三: 染色
10、在 1～5×105 细胞沉淀中加入500 μL 溶液A，轻柔悬浮细胞。
11、加入 5 μL 溶液B 轻柔混匀后，再加入5 μL 溶液C，轻柔混匀。注意：溶液C 为碘化丙啶，有毒，操作时需戴手套。
12、室温避光孵育5～15 分钟。注意：可以用铝箔包住试管完成避光处理。
13、进行后续的荧光显微镜或流式细胞仪的观察和检测。注意：需在1 小时内进行后续处理。
四：荧光显微镜观察
14、1000 g 离心（1000-2000 rpm）离心5 分钟，收集细胞。
15、用一滴（50-100 μL）的溶液A 重悬细胞。
16、涂片后放置在荧光显微镜下用双色滤光片（FITC 和罗丹明）观察。Annexin V-FITC 荧光信号将呈绿色，PI 荧光信号将呈红色。典型结果如下：
图注：凋亡早期的胸腺细胞（FITC+/PI-）；中图和右图：相对凋亡晚期的胸腺细胞（FITC+/PI+）。Annexin V 标记的小泡在细胞表面很明显。
五：流式细胞仪分析
17、将流式细胞仪的激发波长设置在Ex=488 nm; 发射波长设置在Em=530nm。Annexin V-FITC 的绿色荧光通过FITC 通道（FL1）检测；PI 红色
荧光通过PI 通道（FL2 或FL3）检测，建议使用FL3。注意：需要使用未经凋亡诱导处理的正常细胞，作为对照进行荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。典型结果如下：
图注：散点图的左下限（FITC-/PI-）显示活细胞，右下限（FITC+/PI-）显示凋亡早期细胞，右上限（FITC+/PI+）显示凋亡细胞凋亡晚期细胞或坏死细胞。
附：直接用盖玻片培养细胞并诱导细胞凋亡
1、将细胞于盖玻片上生长，用适当的凋亡诱导剂诱导细胞凋亡。注意：必须设立没有经过凋亡诱导剂处理的阴性对照。
2、用 PBS 洗涤细胞两次。
3、在 500μL 的溶液A 中加入5μL 溶液A 和5 μL 的溶液C，轻柔混匀。
4、将上述溶液滴加于盖玻片表面，使盖玻片表面均匀覆盖。
5、室温下避光反应 5 分钟后，将盖玻片放置在荧光显微镜下用双色滤光片（FITC 和罗丹明）观察。Annexin V-FITC 荧光信号将呈绿色，PI 荧光信号将呈红色。
产品编号：BTN81025
规格：25T/50T
产品及特点：
细胞凋亡是细胞的基本特征之一，它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面起着十分重要的作用。在细胞凋亡过程中，细胞内膜的磷酯酰丝氨酸外翻到细胞外膜，而Annexin V（膜联蛋白V）对其有天然的高亲和能力，故可以用FITC 标记（绿色荧光）的Annexin V 来检测细胞凋亡，但本方法的缺点是不能区分早期和晚期的凋亡细胞。早期和晚期的凋亡细胞的一个重要区别在于细胞膜的完整性（凋亡早期细胞没有丧失膜的完整性），故可以用碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）来染色加以区分。其原理图如下：
本产品就是整合了上述两种方法的高灵敏的细胞凋亡检测试剂盒，具下列特点：
1. 即开即用，不需要专门花时间准备各种成分。
2. 整合了Annexin V-FITC 和PI 检测法的优点，提高了凋亡细胞检测的灵敏度和特异性，本方法是目前最灵敏的细胞凋亡检测方法。
3. 跟流式细胞仪、荧光显微镜或其它荧光检测兼容。
4. 本产品适用于培养细胞（悬浮或贴壁），不适用于组织样品。
规格及成分：
| 成分 | 25T | 50T |
| 溶液A | 12.5ml | 25ml |
| 溶液B（Annexin V-FITC） | 125μl | 250μl |
| 溶液C（Propidium Iodide） | 125μl | 250μl |
| 说明书 | 1份 | 1份 |
常温运输，4℃保存，有效期半年。
自备试剂：
PBS、胰酶消化液（无EDTA）。
使用方法：
一: 收集悬浮细胞
1、对细胞进行细胞凋亡刺激后，1000 g 离心（1000-2000 rpm）离心5 分钟，弃上清，收集细胞。
2、用自备的PBS 洗涤细胞二次，最后用PBS 重悬细胞并计数。
3、取 1～5×105 细胞(1-5 万个细胞)，1000 g 离心（1000-2000 rpm）离心5 分钟，弃上清。
二: 收集贴壁细胞
4、吸出培养液到干净试管中后，用PBS 洗涤贴壁细胞一次。
5、用胰酶消化液（无EDTA）消化贴壁细胞。
6、迅速加入培养液终止消化反应。
7、将得到的细胞转移到离心管内，1000 g 离心（1000-2000 rpm）离心5分钟，弃上清，收集细胞。
8、用自备的PBS 洗涤细胞二次，最后用PBS 重悬细胞并计数。
9、取 1～5×105 细胞(1-5 万个细胞)，1000 g 离心（1000-2000 rpm）离心5 分钟，弃上清。
三: 染色
10、在 1～5×105 细胞沉淀中加入500 μL 溶液A，轻柔悬浮细胞。
11、加入 5 μL 溶液B 轻柔混匀后，再加入5 μL 溶液C，轻柔混匀。注意：溶液C 为碘化丙啶，有毒，操作时需戴手套。
12、室温避光孵育5～15 分钟。注意：可以用铝箔包住试管完成避光处理。
13、进行后续的荧光显微镜或流式细胞仪的观察和检测。注意：需在1 小时内进行后续处理。
四：荧光显微镜观察
14、1000 g 离心（1000-2000 rpm）离心5 分钟，收集细胞。
15、用一滴（50-100 μL）的溶液A 重悬细胞。
16、涂片后放置在荧光显微镜下用双色滤光片（FITC 和罗丹明）观察。Annexin V-FITC 荧光信号将呈绿色，PI 荧光信号将呈红色。典型结果如下：
图注：凋亡早期的胸腺细胞（FITC+/PI-）；中图和右图：相对凋亡晚期的胸腺细胞（FITC+/PI+）。Annexin V 标记的小泡在细胞表面很明显。
五：流式细胞仪分析
17、将流式细胞仪的激发波长设置在Ex=488 nm; 发射波长设置在Em=530nm。Annexin V-FITC 的绿色荧光通过FITC 通道（FL1）检测；PI 红色
荧光通过PI 通道（FL2 或FL3）检测，建议使用FL3。注意：需要使用未经凋亡诱导处理的正常细胞，作为对照进行荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。典型结果如下：
图注：散点图的左下限（FITC-/PI-）显示活细胞，右下限（FITC+/PI-）显示凋亡早期细胞，右上限（FITC+/PI+）显示凋亡细胞凋亡晚期细胞或坏死细胞。
附：直接用盖玻片培养细胞并诱导细胞凋亡
1、将细胞于盖玻片上生长，用适当的凋亡诱导剂诱导细胞凋亡。注意：必须设立没有经过凋亡诱导剂处理的阴性对照。
2、用 PBS 洗涤细胞两次。
3、在 500μL 的溶液A 中加入5μL 溶液A 和5 μL 的溶液C，轻柔混匀。
4、将上述溶液滴加于盖玻片表面，使盖玻片表面均匀覆盖。
5、室温下避光反应 5 分钟后，将盖玻片放置在荧光显微镜下用双色滤光片（FITC 和罗丹明）观察。Annexin V-FITC 荧光信号将呈绿色，PI 荧光信号将呈红色。