BTN81027 TRIzol伴侣

TRIzol伴侣说明书
产品编号：BTN81027
规格：50T
产品及特点：
TRIzol 是美国Invitrogen 公司的、用于总RNA 提取（主要是动物总RNA 提取）的著名产品，具有广大的客户群。但其缺点之一是一直没有柱式升级产品，客户仍然要使用既繁琐又费事的非柱式操作（另一缺点是不能用于富含多糖和多酚的材料）为解决此问题，我们特推出本产品，主要特点是：
跟TRIzol 结合使用，把经典操作变成了柱式操作，简化了实验流程，用户可以节约 30 分钟的时间。其他特点如下:
1. RNA 质量更好，因为操作简短减少了 RNA 在提取过程中的降解。
2. RNA 纯度更高，OD260/OD280 一般在 1.9 以上，比经典 TRIzol 法得到的更纯。
3. 专门的洗涤条件能有效去除基因组 DNA，进一步减少其对 RNA 的污染。
4. 适用于其他基于酸酚/ 异硫氰酸胍提取原理的RNA 提取产品, 包括TRIzol、TRIzol LS、TRI Reagent 等。
5. 可以省略氯仿处理步骤，避免接触有毒试剂（但效果稍差）。
规格及成分：

成分	规格
溶液A	50ml
硅胶膜离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA 洗脱液	10ml
说明书	1份

保存条件：
常温运输和保存，有效期一年。
自备试剂：
TRIzol 或 TRIzol 同类产品、氯仿。
使用方法：
1. 按 TRIzol 的使用说明书进行总 RNA 提取到加氯仿之前一步。
2. 如果需要加氯仿，则继续按TRIzol的使用说明书操作，用氯仿处理裂解液离心后得到上清液。如果省略氯仿处理步骤，则需要将裂解物直接离心。
3. 将经过氯仿处理得到的上清液或没有经过氯仿处理直接离心得到的裂解液转移至一个干净的 1.5 mL 塑料离心管中。注意：如果是经过氯仿处理，则离心后，下层有机相和中间层将含有DNA 和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和 DNA 污染。为保险起见，可以留下100 μL 上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的丝状DNA。
4. 加入等体积的溶液 A，颠倒混匀 30 秒。
5. 根据混合物的多少，一次或分两次转移到离心吸附柱中。
6. 每次转移后，需要13000-15000 g 室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
7. 加0.7 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。但如果样品OD260/280 比值不高，可以再用0.3 mL 通用洗柱液重复此步一次。
8. 室温离心半分钟。此步对去除残留通用洗柱液十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA 的质量和使用。
9. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 收集管中，加入50-100 μL RNA 洗脱液。
10. 室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA 样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
11. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做Northern 杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA 电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA 分子（BioTechniques，28：414，2000）。
12. RNA 产量产率测定：将5-10 μL RNA 溶于TE 缓冲液中（pH 7.5-8.2之间）检测其在OD260 的光吸收。通过光吸收可以得出RNA 浓度（1OD260 的RNA=40 μg/mL），进而计算出RNA 的产量（浓度 X 体积）和产率（RNA 产量/组织用量）。
13. RNA 纯度测定：无污染的总RNA 的OD260/OD280 一般在1.8-2.1 之间（具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关），高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR 等反应。
疑难解答：
Q：上样孔里的红色荧光物一定是DNA 污染吗？
A：不是。用TAE 或TBE 电泳液和非变性胶电泳RNA 时容易产生此现象，百奥莱博初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA 通过碱基互补或通过硼酸络合（如果使用TBE 作电泳液的话）形成的复合物，加RNase 处理后，这些红色荧光物（RNA）一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳和RNA 专用上样液（如我公司的RNAon）。
Q：如何确认和去处除污染的基因组DNA？
A：如果怀疑有DNA 污染，可以用RNase 处理RNA 样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组DNA 污染。进一步确认可以使用PCR 扩增法。去除污染的DNA 可以使用百奥莱博的非酶的DNA 去除剂DNA Erasol 或RNase-free DNase，由于RNase-free
DNase 一般都有残留的RNase 污染，所以必须严格按照厂家提供的说明书进行操作。