BTN81201 酵母电转感受态细胞制备试剂盒

酵母电转感受态细胞制备试剂盒说明书
产品编号：BTN81201
规格：20T
产品及特点：
本酵母电感受态细胞制备试剂是一种通过化学处理酿酒酵母和裂殖酵母电感受态细胞，使之不但马上能用于电转化，还能长期放置后用于电转化。它具有下列特点：
1. 操作简单，单溶液制备，除酵母培养的时间外，整个操作只需要10余分钟。
2. 制备得到的感受态细胞可以-80℃保存一年，方便多次使用，免去每次转化都要新鲜制备感受态细胞。
3. 主要用于酿酒酵母S.cerevisia 和S.pombe，但能否用于其他酵母（如C.albicans、Pichia pastoris 等）不详。
4. 最高转化效率可达到0.2-1×106 个转化子/ug 质粒DNA。
5. 得到的感受态细胞可以用各种线性或环状酵母穿梭质粒DNA 进行转化，例如YIp, YRp, YCp, YEp 和YAC 等。
6. 可以用于酵母双杂交、定点突变（Site－Directed Mutagenesis）、基因破坏（Gene Disruption）、等位突变基因修复（Mutant Allele Recovery）等实验。
7. 本试剂盒足够处理200mL酵母菌液，制备40管酵母感受态细胞。
规格及成分：

成分	规格
酵母电转感受态细胞制备试剂	100ml
说明书	1份

保存条件：
常温运输和保存，有效期一年。
自备试剂：
灭菌水，SD液体培养基（不含氨基酸的0.67% Bacto Yeast Nitrogen Base，2%葡萄糖），SD固体培养基（在SD液体培养基中再加2%琼脂），YPD液体培养基（1% Bacto Yeast Extract, 2% Bacto Peptone, 2%葡萄糖），YPD固体培养基（在YPD液体培养基中再加2%琼脂）
使用方法：
一：电感受态细胞的制备
说明：按本方法制备1 管酵母电感受态细胞就需要OD600 达到1.0的新鲜酵母培养液5 mL，用户需根据制备的酵母感受态细胞数量决定培养细胞的体积。下面操作只是以10mL酵母为例说明。
1. 培养S.pombe 细胞：挑取新鲜单菌落（4℃放置不超过3周的也可以），接种到10 mL SD 液体培养基中。30℃摇晃培养，摇床速度250rpm/分钟，直到OD600达到1.0左右（相当于1×10⁷ 细胞/mL）。
2. 培养S.cerevisiae 细胞：挑取新鲜单菌落（4℃放置不超过3 周的也可以），接种到装在10 mL YPD 液体培养基中。30℃摇晃培养，摇床速度250rpm/分钟，直到OD600 达到1.0左右（相当于1×10⁷ 细胞/mL）。
3. 冰上放置15分钟。
4. 室温1600rpm 离心5 min，弃上清。
5. 用冰浴的灭菌水洗涤3 次。
6. 用0.2 mL冰浴的本产品重悬细胞。
7. 按每管0.1 mL分装到1.5-2mL的冷冻管中，直接放入-80℃冰箱待用。
注意：不能放在液氮中，否则将丧失电转化能力。
二：电转化酵母感受态细胞
1. 将装有0.1 mL感受态细胞的冷冻管从冰箱取出的、放置在30℃水浴中快速化冻（快速化冻的效果好于缓慢化冻）。
2. 用1mL冰浴的本产品洗涤一次。
3. 加入50μL冰浴的本产品重悬细胞。
4. 加入1-30 ng 质粒DNA 并轻柔混匀。
5. 转移到预冷的、距离为0.2cm的电击杯中。
6. 按电击仪的手册设置电击参数并进行电击处理，参考条件为：10kV/cm (对0.2 cm的电击杯，则为2kV), 5ms(25F, 200)（各厂家仪器的使用略有不同，请严格按电击仪厂家提供的手册进行操作）。
7. 电击后将细胞转移到1mL预冷的本产品中，轻柔混匀。
8. 取0.2 mL 转化细胞涂盘（S.pombe 细胞需涂盘在SD 固体培养基上，S.cerevisiae 细胞需涂盘在YPD固体培养基上），30℃培养4-6天。