BTN81224 BCIPNBT显色试剂盒

BCIP/NBT显色试剂盒说明书
产品编号：BTN81224
规格：100mL
产品及特点：
BCIP 即5- 溴-4- 氯-3- 吲哚- 磷酸盐（ 5-bromo-4-chloro-3-inodlylphosphate）。NBT 即四唑淡蓝（Nitro-Blue-Tetrazolium），为深蓝色无定形微溶物质。当二者存在时，在碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase, AP）作用下，NTB 被还原形成不溶性的蓝色（在硝酸纤维素膜上）或紫色（在尼龙膜上）沉淀，据此颜色反应来鉴定碱性磷酸酶。该反应的示意图如下：
 
本产品就是基于上述原理开发，它具有下列特点：
1. 即开即用，省去自配溶液的麻烦。
2. 条件经过优化，最低可以检测到0.5fmol 的靶分子（在硝酸纤维素膜上），并且背景低，不需要自己摸索。
3. 与硝酸纤维素膜和尼龙膜兼容，也可用于琼脂糖凝胶原位杂交。
4. 适用于中等灵敏度检测各种印迹膜检测，包括Southern杂交、Northern杂交、Western blot 沉淀、免疫组化等。如果要高灵敏度检测，最好使用ECL 检测。
5. 肉眼观察实验结果，直观简单，不需要额外的试剂和仪器。
规格及成分：

成分	规格
25×BCIP	1ml
25×NBT	1ml
AP 缓冲液，10×	50ml
说明书	1份

注意：本产品可以配制100mL BCIP/NBT 显色液，具体使用次数与膜的大小密切相关。
保存条件：
常温运输，4℃避光保存，有效期一年。
自备试剂：
超纯水、结合有AP 标记的探针或抗体的印迹膜。
使用方法：
一：配制溶液

• 按每cm² 印迹膜需要0.1mL BCIP/NBT 显色液的比例计算所需显色液的用量，并按下表的配方配制的所需量的BCIP/NBT 显色液待用。说明：下表以10 mL 为例，用户需要根据计算得到的所需显色液体积按比例增减各成分用量。

成分	用量
超纯水	9ml
AP 缓冲液，10×	1ml
BCIP 溶液	50μl
NBT 溶液	50μl

注意：此溶液必须在1 小时内使用。
2. 用10×AP缓冲液配制跟NBT-BCIP显色液等体积的1×AP缓冲液待用。
二：显色
3. 同钝头镊子将印迹膜浸入到新鲜配制的1×AP缓冲液中，脱色摇床上摇晃5分钟。本方法也可以用于琼脂糖凝胶原位杂交，处理方法一样，只是把经过AP 标记探针或抗体杂交的印迹膜改成经过AP 标记探针或抗体杂交的凝胶。
4. 同钝头镊子将印迹膜浸入到新鲜配制的BCIP/NBT 显色液中（每cm² 印迹膜需要0.1 mL BCIP/NBT 显色液），室温避光静置显色直到看见所需条带。在硝酸纤维素膜上，条带将呈现蓝色；在尼龙膜上，条带将呈现紫棕色。注意：显色过程中不要摇晃，否则有色沉淀物不容易聚集。高丰度的靶分子可能只需5-30分钟显色，低丰度的靶分子可能需要24 小时显色。显色反应一般会在24 小时结束，所以显色时间没有必要超过24 小时。37℃放置可加速显色反应，缩短显色时间。
5. 显色结束后，将印迹膜转移到盛有超纯水的托盘中摇晃以终止显色反应。数分钟后需要换水，共三次。
6. 用吸水纸吸干膜上的水分，照相或扫描处理后避光干燥保存印迹膜。对硝酸纤维素膜，如果用二甲苯将膜浸湿，则条带会增强约5 倍（膜变得透明，使背景变低，条带更明显所致）。
7. 如果不避光保存条，印迹膜上的条带会逐渐褪色。硝酸纤维素膜上的颜色不能脱去，如果想脱去尼龙膜上条带的颜色，可以将膜浸入到装在玻璃容器的DMF 溶液中，再进行热水浴直到颜色脱去（需要在通风柜中进行）。硝酸纤维素膜上的条带不能脱去。