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BTN90408 即用型荧光定量PCR试剂盒
发布时间：2017-10-01 09:57 | 点击次数：279
即用型荧光定量PCR试剂盒说明书
产品编号：BTN90408
规格：100T/600T
产品及特点：
本产品是基于荧光染料检测的即用型PCR试剂盒，可以对靶片段进行实时定量PCR分析（quantitative PCR、qPCR）。产品含有经过优化的缓冲液组分、Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2及新型荧光染料DNAgreen等所有实时定量PCR所需要的成分，用户只需加入模板和引物即可进行实时定量PCR反应和HRM分析，具有广泛的用途。
1. 方便，用户只需准备模板和引物既可以进行实时定量PCR实验和HRM（High Resolution DNA Melt Curve Analysis）分析。而基于SYBR Green I和LC Green染料的qPCR mix则不能同时用于上述两种实验。
2. 使用第三代饱和型荧光染料，信号强，不会抑制PCR反应。
3. 快捷，即用型的预配液使加样操作步骤大大简化，避免了交叉污染，降低实验误差。
4. 各成分的浓度和比例都经过精心优化，反应的灵敏度高，特异性强。能检测到浓度为50拷贝/mL的靶分子。
规格及成分：
保存条件：
低温运输，-20℃保存, 保存期限为6个月。
自备试剂：
DNA模板、引物、超纯水。
使用方法：
放入荧光PCR仪中进行扩增, 并在退火或延长步骤中记录荧光信号。
注意：
a) 通常引物浓度以0.2 μM可得到较好结果，可以终浓度0.1-1.0 μM作为设定范围的参考；通常DNA模板的量以10-100 ng基因组DNA或1-10 ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
b) ROX 校正染料：如果使用ABI公司的7500，7700和7900三种型号的荧光PCR仪器，则需用自备的ROX进行Ct值校正。对ABI 7700和7900，ROX的最佳浓度为1×（即在每20 μL 反应体系中加2 μL 10×ROX）。对ABI 7500， ROX的最佳浓度为0.05-0.1×（每20 μL 反应体系加0.1-0.2 μL 10×ROX；也可将10×ROX稀释到1×，然后每个反应体系加入1-2 μL 1×ROX）。ROX会在溶解曲线中产生噪音，因此，如果出现了杂峰，将软件中“Passive Reference Dye”中的“ROX”选项取消打勾，然后重新分析数据。
对于iCycler IQ, MJ Opticon, MJ Chromo4, MX3000, MX4000, RotorGene3000, RotorGene 6000 和 LightCycler 480等型号的荧光PCR仪器，ROX不是必须的，但加入的话也不会影响整个PCR分析。
2. 循环步骤：根据扩增子的性质和仪器性能，从以下三个过程中任选一个进行扩增。
A：两步快速循环法：适用于引物Tm值设计为60℃的反应
注意：本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、10 min条件下实现酶的活化。退火温度请以60-64℃作为设定范围的参考，发生非特异性反应时，可提高退火温度。
B：三步快速循环法：适用于延伸步骤温度高于退火步骤的PCR（长引物PCR）
注意：
a) 退火温度：建议采用两步法PCR，退火温度60℃进行反应。若提高反应特异性，可提高退火温度，以60-64℃作为设定范围的参考。若因使用Tm值较低的引物等原 因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，三步法的退火温度请以56℃-64℃的范围作为设定参考。延伸温度：延伸温度设为72℃通常可以提高扩增效率。但是，对于AT含量大于70%的扩增子来说，延伸温度设为60℃为宜。
C：通用循环法：这种循环方法适用于几乎所有的荧光PCR仪，也适用于用快速循环法不能扩增的模版。
3. 数据采集
具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在没结合DNA时，最大吸收光谱在471nm，结合DNA时的最大吸收光谱在500nm，最大发射光谱在530nm。
其他注意事项：
1. 如果使用iCycler，可以不加入FAM。
2. 如果使用Roche LightCycler的玻璃毛细管进行PCR，需加入终浓度为0.5mg/mL的自备BSA。
产品编号：BTN90408
规格：100T/600T
产品及特点：
本产品是基于荧光染料检测的即用型PCR试剂盒，可以对靶片段进行实时定量PCR分析（quantitative PCR、qPCR）。产品含有经过优化的缓冲液组分、Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2及新型荧光染料DNAgreen等所有实时定量PCR所需要的成分，用户只需加入模板和引物即可进行实时定量PCR反应和HRM分析，具有广泛的用途。
1. 方便，用户只需准备模板和引物既可以进行实时定量PCR实验和HRM（High Resolution DNA Melt Curve Analysis）分析。而基于SYBR Green I和LC Green染料的qPCR mix则不能同时用于上述两种实验。
2. 使用第三代饱和型荧光染料，信号强，不会抑制PCR反应。
3. 快捷，即用型的预配液使加样操作步骤大大简化，避免了交叉污染，降低实验误差。
4. 各成分的浓度和比例都经过精心优化，反应的灵敏度高，特异性强。能检测到浓度为50拷贝/mL的靶分子。
规格及成分：
| 成分 | 100T | 600T |
| qPCR MagicMix，2× | 1ml | 6ml |
| 说明书 | 1份 | 1份 |
低温运输，-20℃保存, 保存期限为6个月。
自备试剂：
DNA模板、引物、超纯水。
使用方法：
- 以20 μL的qPCR反应体系为例：在一干净的PCR管中，加入下列成分：
| 反应体系成分 | 20μl体系 | 终浓度 |
| qPCR MagicMix，2× | 10μl | 1× |
| 自备引物一 | x μL | 0.1-0.5μM |
| 自备引物二 | x μL | 0.1-0.5μM |
| 自备模板 | x μL | |
| 自备ROX | 2μl | （可以不加） |
| 补超纯水到 | 20μl |
注意：
a) 通常引物浓度以0.2 μM可得到较好结果，可以终浓度0.1-1.0 μM作为设定范围的参考；通常DNA模板的量以10-100 ng基因组DNA或1-10 ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
b) ROX 校正染料：如果使用ABI公司的7500，7700和7900三种型号的荧光PCR仪器，则需用自备的ROX进行Ct值校正。对ABI 7700和7900，ROX的最佳浓度为1×（即在每20 μL 反应体系中加2 μL 10×ROX）。对ABI 7500， ROX的最佳浓度为0.05-0.1×（每20 μL 反应体系加0.1-0.2 μL 10×ROX；也可将10×ROX稀释到1×，然后每个反应体系加入1-2 μL 1×ROX）。ROX会在溶解曲线中产生噪音，因此，如果出现了杂峰，将软件中“Passive Reference Dye”中的“ROX”选项取消打勾，然后重新分析数据。
对于iCycler IQ, MJ Opticon, MJ Chromo4, MX3000, MX4000, RotorGene3000, RotorGene 6000 和 LightCycler 480等型号的荧光PCR仪器，ROX不是必须的，但加入的话也不会影响整个PCR分析。
2. 循环步骤：根据扩增子的性质和仪器性能，从以下三个过程中任选一个进行扩增。
A：两步快速循环法：适用于引物Tm值设计为60℃的反应
| 循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 酶活化 | 95℃ | 10min | 1 |
| 变性 | 95℃ | 15s | 35-40 |
| 退火&延伸 | 60℃ | 1min |
B：三步快速循环法：适用于延伸步骤温度高于退火步骤的PCR（长引物PCR）
| 循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 酶活化 | 95℃ | 10min | 1 |
| 变性 | 95℃ | 10s | 35-40 |
| 退火 | 56-64℃ | 30s | |
| 延伸 | 72℃ | 32s |
a) 退火温度：建议采用两步法PCR，退火温度60℃进行反应。若提高反应特异性，可提高退火温度，以60-64℃作为设定范围的参考。若因使用Tm值较低的引物等原 因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，三步法的退火温度请以56℃-64℃的范围作为设定参考。延伸温度：延伸温度设为72℃通常可以提高扩增效率。但是，对于AT含量大于70%的扩增子来说，延伸温度设为60℃为宜。
C：通用循环法：这种循环方法适用于几乎所有的荧光PCR仪，也适用于用快速循环法不能扩增的模版。
| 循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 酶活化 | 96℃ | 10min | 1 |
| 变性 | 96℃ | 15s | 35-40 |
| 退火&延伸 | 60℃ | 1min |
具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在没结合DNA时，最大吸收光谱在471nm，结合DNA时的最大吸收光谱在500nm，最大发射光谱在530nm。
其他注意事项：
1. 如果使用iCycler，可以不加入FAM。
2. 如果使用Roche LightCycler的玻璃毛细管进行PCR，需加入终浓度为0.5mg/mL的自备BSA。