BTN90501 Tth DNA聚合酶

Tth DNA聚合酶说明书
产品编号：BTN90501
规格：250U
产品及特点：
本酶来源于嗜热菌Thermus thermophilus HB8。在有Mg2+等二价阳离子存在的情况下，具有DNA 多聚酶活性。它与Taq 酶一样被广泛用于PCR反应，但耐热性比Taq 酶高，因此对高GC 含量模板的PCR 也有较好的效果。本酶基本上没有3'→5'外切酶活性及5'→3'外切酶活性，所以也可用于双脱氧法测序。另外，本酶具有RTase 活性，在Mn2+存在的情况下，RTase活性会得到强化。利用该特性，可以用来在同一管中进行逆转录反应和PCR反应，即一步法RT PCR。（但是，在Mn²⁺存在时，RT-PCR 的准确性不高）此外，本酶与Taq DNA多聚酶一样，PCR产物可通过T载体进行TA克隆。
它具有下列特点：
1. RT-PCR 反应的特异性增加：在较高的温度下进行逆转录，增加了引物杂交和延伸的特异性。
2. 二级结构减少：在较高的温度下进行逆转录，减少了由于RNA二级结构引起的问题。
规格及成分：

成分	规格
Tth DNA 聚合酶(5U/μL)	50μl
10×Tth Buffer	1ml
说明书	1份

保存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。
使用方法：
以λDNA 为模板，以10×Tth Buffer (+ MgCl2)作为缓冲液进行体积为50μL的PCR 扩增反应为例
1.按下列组份配制PCR 反应液。

成分	终浓度	用量
Tth DNA 聚合酶(5U/ uL)	1.25U	0.25μl
10×Tth Buffer (+MgCl2)	1×	5μl
dNTP Mixture（各2.5 mM）	各0.2 mM	4μl
模板DNA	50 pg-1 μg	详见下表
引物1（10 μM）	0.1-1 μM	最多到1 uL
引物2（10 μM）	0.1-1 μM	最多到1 uL
灭菌蒸馏水		加到50 uL

 
 
 
推荐50μL PCR反应体系中模板DNA推荐使用量：

哺乳动物基因组DNA	0.5-1 μg
酵母基因组DNA	5-500 ng
细菌基因组DNA	0.5-50 ng
质粒DNA	5-500 pg
PCR 回收片段	1-100 pg

2.PCR 反应条件
以λDNA 为模板，扩增1 kbp 的DNA 片段的PCR 反应条件如下：
 
注：PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定最佳的反应条件（温度、时间等）。
注意事项:
1. 循环测序
该酶为耐热性酶，可通过与PCR 同样的温度条件进行测序反应。由于其高温稳定性好，对于复杂高级结构的模板效果较好。
2. 引物
用于耐热性酶测序的引物需比用于非耐酶测序的引物设定更长的时间。采用较短的引物时，可能会出现不能获得条带变淡的情况。