BTN90506 胶回收及PCR片段纯化两用试剂盒

胶回收及PCR片段纯化两用试剂盒说明书
产品编号：BTN90506
规格：50T/100T
产品及特点：
本试剂盒可用于从琼脂糖凝胶中回收DNA片段和PCR产物回收，并且对于一些酶反应液回收（酶切、连接、探针标记等）也同样适用。试剂盒采用可以高效、专一结合DNA的硅胶膜。可回收50 bp－40 kb的DNA片段，回收效率最高可达90%。得到的DNA可直接用于连接、转化、酶切、测序、杂交等分子生物学实验。
1. 高效，回收效率最高可达90%（跟片段大小和胶浓度等因素有关）。
2. 快速，整个过程只需要十余分钟。
3. 纯度高，本试剂盒回收的DNA可直接用于酶切、连接、PCR等多种分子生物学实验。
4. 用途广，本试剂盒能回收单链、双链及环状DNA。
规格及成分：

成分	50T	100T
通用溶胶液	25ml	50ml
通用洗柱液	50ml	100ml
离心吸附柱	50套	100套
DNA洗脱液2.0	5ml	10ml
说明书	1份	1份

保存条件：
常温运输，4℃保存(长期)或室温保存(短期)，有效期为一年。
使用方法：
一：胶回收
1. 切取含 DNA 片段的琼脂糖凝胶（100 mg 左右，尽可能多地把多余的胶切除，否则会影响回收效率），放入 1.5 mL 离心管中，用移液枪头捣碎，按重量比为 1：3 到 1：5 的比例加入通用溶胶液(100 mg 琼脂糖凝胶需要加入 300 μL-500 μL 通用溶胶液)。
a) 注：纯化 PCR 等反应体系中的 DNA 时可以直接在反应管中加 3-5 倍体积的通用溶胶液，混匀，然后跳过第 2 步、直接从第 3 步做起。
2. 65℃保温使胶完全溶化（一般需要5 分钟），其间可以振荡数次以促进琼脂糖凝胶的溶化。
3. 将离心管中的溶液转移到高载量离心吸附柱中，套上液体收集管，静置3分钟，12,000 rpm 离心 1 分钟并倒掉收集管中的液体。若一次加不完，可分两次加入并离心。
4. 加入 500-600 μL 通用洗柱液于离心柱中，室温静置 2 分钟，12,000rpm 离心 1 分钟，倒弃收集管中的废液。
5. 12,000 rpm 离心半分钟以去除离心柱中的残留液体。
6. 将离心柱置于一新的干净的离心管（自备）中，加入 25-50 μL 的DNA 洗脱液2.0 于离心吸附柱硅胶膜的中央，静置3 分钟，12,000 rpm 离心1分钟。
7. 离心管底部所得溶液即为纯化的DNA 溶液，可立即用于后续实验或者放冰箱长期保存。
二：PCR 片段回收
1. 在含 DNA 片段的 PCR 反应产物中，加入 3 倍体积的通用溶胶液。
2. 60℃水浴 5 分钟。
3. 将离心管中的溶液转移到离心吸附柱中，套上液体收集管，静置 3 分钟，12,000 rpm 离心半分钟并倒掉收集管中的液体。
4. 加入 700 μL 通用洗柱液于离心柱中，室温静置 2 分钟，12,000 rpm 离心半分钟，倒弃收集管中的废液。
5. 12,000 rpm 离心半分钟以去除离心柱中的残留液体。
6. 将离心柱置于一新的干净的离心管（自备）中，加入30-50 μL 的 DNA 洗脱液2.0 于离心吸附柱硅胶膜的中央，静置 3 分钟，12,000 rpm 离心1分钟。
7. 离心管底部所得溶液即为纯化的DNA 溶液，可立即用于后续实验或者放冰箱长期保存。
注意事项：

• 电泳回收DNA 时，电泳缓冲液可以为TAE、TBE 或者百奥莱博DNA/RNA两用快速电泳液SuperBuffer-2。回收效果为SuperBuffer-2 最好，TAE次之，TBE 最差。
• 通用洗柱液含有容易挥发物质，使用后一定要拧紧瓶盖，密闭保存。

3. 液体转移到离心柱后，可以延长静置时间使 DNA 与膜充分结合，提高回收效率。
4. 加专用上柱液的作用是洗盐。
5. 洗脱 DNA 前的空甩很重要，以去除膜上残留酒精，否则残留酒精会影响后续 DNA反应。
6. 加 TE 洗脱 DNA 时，最好把离心柱放入 50-65℃水浴加热，但要注意把离心管密闭好；增大 TE 使用量有利于回收，但要注意实际上样量与最终回收体积的关系，以便于计算回收率。TE 可以用水替代，但pH 不能低于7.5。
疑难解答：
Q：为何用硅胶膜吸附柱法回收TBE胶中的DNA效果不好？
A：因为TBE中的硼酸会跟硅胶表面的OH基团反应，而这些OH又是吸附DNA所必需的。