BTN90605 TdT加尾法DNA探针标记试剂盒

TdT加尾法DNA探针标记试剂盒说明书
产品编号：BTN90605
规格：5次(A)/5次(B)/5次(C)
产品及特点：
本产品是基于TdT末端转移酶能够在DNA 的3’端添加dNTP尾巴的原理而设计，该反应的示意图如下：
 
本产品是在上述原理的基础上开发的，具有下列特点：
1. 快速，15分钟即可完成标记反应。
2. 不但可用于单链DNA和DNA Oligo标记，还可用于3’突出的双链DNA标记，但后者标记效率稍低。
3. 可用同位素底物和非同位素底物（生物素和地gao辛标记的核苷酸等）。
4. 提供不带标记核苷酸、带生物素标记核苷酸和带地gao辛标记核苷酸三种选择。
5. 同时提供非标记的dATP，用户可以用其调节加尾长短和标记核苷酸掺入比例。
6. 标记的探针可用于电泳迁移率实验（EMSA）、原位杂交（ISH）、Northern Blot（不推荐用于低丰度RNA检测）、小RNA Northern、Southern Blot（不推荐用于单拷贝基因检测）、菌落杂交、斑点印迹杂交分析等。
规格及成分：

成分	规格
TdT缓冲液，5×	20μl
TdT（末端转移酶，10 U/μL）	10μl
dATP，2 mM	5μl
标记核苷酸	（A、B、C不同，见注）
超纯水	1ml
说明书	1份

注：A型用于自选标记，用户需自备标记核苷酸，本产品不提供标记核苷酸；B型提供5 μL Biotin-11-dUTP；C型提供含5 μL DIG-11-dUTP。
保存条件：
低温运输，-20℃保存，有效期一年。
自备试剂：
DNA模板。
使用方法：
1. 在0.2 mL微量离心管中按下表设置一个20 μL体系的标记反应（如果需要标记更多探针，请增加标记体积而不要增加探针DNA的浓度）：

成份	用量
探针DNA	100-200 pmol
TdT Buffer，5×	4 μL
标记核苷酸，1 mM （A型需自备标记核苷酸）	1 μL
dATP，2 mM	（见下注）
TdT末端转移酶（10 U/μL）	2 μL
超纯水	补到20 μL

注: dATP可以不加，但这样得到的加尾全部是标记核苷酸，由于空间阻碍，灵敏度不一定最佳。如果杂交效果不好，掺入一定比例的dATP到标记核苷酸中，以控制标记的密度，提高比活。具体比例如何可以自己优化。
2. 37℃反应15分钟，延长到30分钟也可以。如果没有非标记核苷酸存在，一般可以加尾3-5个Biotin或DIG标记的核苷酸（标记物空间阻碍抑制延长）；如果有在加尾反应中加入一定比例的非标记核苷酸dATP（其他dNTP也可，只是本试剂盒只提供dATP而已），每条探针上可加上约100个核苷酸，平均含5个标记核苷酸
3. 70℃ 10分钟灭活TdT酶。
4. 如果需要，可以PAGE电泳+银染（相关试剂需要另购）检测标记效率，带标记的探针泳动速度将低于没标记的探针。
5. 如果是非同位素标记，探针不需纯化可以直接用于杂交。如果需要纯化非同位素标记的探针，请不要酚/氯仿抽提，因为非同位素标记物一般会使探针DNA进入有机相而丢失。
6. 使用时需将探针以1-8 ng/μL的终浓度加入到杂交液中（如果探针是双链DNA，加入前还需热变性）。如果不立即使用，非同位素标记的探针DNA可-20℃长期放置一年，同位素标记的探针DNA不能放置。