BTN90702 即用型长片段PCR试剂盒

即用型长片段PCR试剂盒说明书
产品编号：BTN90702
规格：20T
产品及特点：
一般PCR法具有一定的局限性，特别是难以扩增5 kb以上的长链DNA，这严重限制了PCR法的推广和应用。本产品通过改变PCR用DNA聚合酶、PCR用Buffer、PCR扩增条件等，使长链DNA的扩增成为可能。本产品可以很稳定的扩增出终长度小于15 kb的片段。
1.本产品是PCR反应用的DNA Polymerase、Buffer、dNTP Mixture的2倍浓度的混合液，使用时用户只需准备模板和引物既可以进行长片段PCR实验。
2.快捷，操作步骤已经最大限度地简化，能减少污染，降低实验误差。
3.各成分的浓度和比例都经过精心优化，反应的灵敏度高，特异性强。
4.本制品扩增性能好，保存稳定性强。
5、另外使用本制品得到的PCR产物3’端附有一个“A”碱基，可直接克隆于T-Vector中。
规格及成分：

成分	规格
2×Long PCR MagicMix	0.5ml
说明书	1份

保存条件：
低温运输、-20℃保存, 有效期一年。
自备试剂：
DNA模板、引物、超纯水。
使用方法：

2×Long PCR MagicMix	25 μL
DNA模板(自备)
哺乳动物基因组DNA	0.1-1 μg
酵母基因组DNA	50-500 ng
细菌基因组DNA	10-100 ng
质粒DNA	0.1ng-10ng
Long PCR引物1(自备)	20 pmol
Long PCR引物2(自备)	20 pmol
补水到	50 μL

放入PCR仪中进行PCR, 结束后取5-10 μL与上样液混合后上样电泳检测。
Long PCR反应条件（仅供参考）：

3步式Long PCR
预变性	94℃	2 min
Long PCR (30个循环)	98℃	10 sec
	55℃ or 60℃	30 sec
	72℃	1 min /kbp
延伸	72℃	10 min

注）上述Long PCR反应条件仅供参考，具体Long PCR反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需要根据模板、目的片度的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定最佳的反应条件（温度、时间等）。
注意：
1．如果反应体系不是50 μL，各成分需要等按比例增加或减少。
2.  Long PCR的反应体系最好在冰中配制，然后置于PCR反应仪上进行Long PCR反应。这种冷启动法（Cool Start Method）可增强Long PCR扩增的特异性，减少Long PCR过程中的非特异性，能得到良好的Long PCR结果。
3．如果DNA模板中有Long PCR不明抑制物（植物、土壤和血液等DNA样品常含此类抑制物），可以在Long PCR体系中加入1/10的PCR抑制物清除剂（CAT#：60804，30 μL体系中加3 μL），可能会对PCR有帮助。