BTN90707 动植物总蛋白微量提取试剂盒

动植物总蛋白微量提取试剂盒说明书
产品编号：BTN90707
规格：50T
产品及特点：
本产品用于快速提取动植物总蛋白，用于SDS-PAGE 凝胶电泳和Western印迹分析以及蛋白活性测定等。本产品的其主要特点是：
1. 提取过程十分简便，匀浆离心即可，整个过程只需要十几分钟。
2. 采用独特的温和裂解成分，蛋白保持天然活性。
3. 适用于各种动植物组织材料，包括新鲜或冰冻的材料。
4. 得到的提取物可以直接用于SDS-PAGE、2D 电泳、Western印迹分析以及蛋白活性测定等下游实验。
5. 一次可以处理100mg 左右的样品，足够进行几十次SDS-PAGE mini胶电泳检测。
规格及成分：

成分	规格
溶液A	50ml
5×SDS-PAGE上样液	1ml
说明书	1份

保存条件：
常温运输，4℃保存，5×SDS-PAGE 上样液短期4℃保存，长期可放-20℃保存，有效期一年。
使用方法：
使用前，最好请在溶液A 中加入自备的1M DTT 溶液50μL。
一：匀浆法
注意：对致密的实体组织（如肌肉），最好用Polytron 式匀浆机匀浆处理。
1. 称取动物或植物组织样品100 mg，剪刀剪成黄豆大小，转移到10-15 mL 的塑料离心管中。
2. 加入1ml 溶液A，在冰上用Polytron 式匀浆机匀浆，直到没有肉眼可见的组织块。为了避免产热，可以分多次匀浆，其间放冰上让匀浆液冷却。
3. 将匀浆液全部转移到1.5 mL 的塑料离心管中。
4. 4℃ 12,000 g 离心10分钟，组织残渣碎片将形成沉淀。
5. 将上清液转移至一新的1.5 mL 塑料离心管中即得到蛋白溶液，可置于-70℃冰箱保存或立即使用。如果要测定蛋白浓度，请使用BCA 方法，不要使用Bradford 方法（如果要使用，也需要把样品稀释10 倍后再测定，否则溶液A中的成分会影响浓度侧定）。如果要进行SDS-PAGE 电泳，可取部分到离心管中，加入5×SDS-PAGE 上样缓冲液（终浓度为1×），在沸水中处理5分钟后立即上样电泳。
二：直接研磨法
注意：可以使用玻璃和陶瓷的研钵，也可以使用与微量离心管式的研磨杵（BTN80603）
1. 称取动物或植物组织样品100 mg，剪刀剪成黄豆大小，转移到预冷的研钵或离心管中。
2. 加入1ml 溶液A，用研磨杵研磨，直到没有肉眼可见的组织块。
3. 将匀浆液全部转移到1.5 mL 的塑料离心管中。
4. 4℃ 12,000g 离心10分钟，组织残渣碎片将形成沉淀。
5. 将上清液转移至一新的1.5 mL 塑料离心管中即得到蛋白溶液，可置于-70℃冰箱保存或立即使用。如果要测定蛋白浓度，请使用BCA 方法，不要使用Bradford 方法（如果要使用，也需要把样品稀释10 倍后再测定，否则溶液A中的成分会影响浓度侧定）。如果要进行SDS-PAGE 电泳，可取部分到离心管中，加入5×SDS-PAGE 上样缓冲液（终浓度为1×），在沸水中处理5分钟后立即上样电泳。
三：液氮研磨法
注意：最好使用玻璃和陶瓷的研钵
1. 取大约100 mg 动物或植物组织样品，转移到预冷的研钵中。
2. 加入少量液氮，用研磨杵研磨成粉。
3. 加入1ml 溶液A 溶解，然后将溶液全部转移到1.5 mL 的塑料离心管中。
4. 4℃ 12,000 g 离心10分钟，组织残渣碎片将形成沉淀。

• 将上清液转移至一新的1.5 mL 塑料离心管中即得到蛋白溶液，可置于-70℃冰箱保存或立即使用。如果要测定蛋白浓度，请使用BCA 方法，不要使用Bradford 方法（如果要使用，也需要把样品稀释10 倍后再测定，否则溶液A中的成分会影响浓度侧定）。如果要进行SDS-PAGE 电泳，可取部分到离心管中，加入5× SDS-PAGE 上样缓冲液（终浓度为1×），在沸水中处理5分钟后立即上样电泳。

注意事项：
1．如果4℃ 12,000 g 离心10分钟后得到的上清液中还有可见的沉淀，可以将上清转移到一个新的离心管中后再4℃ 12,000 g 离心10分钟，以去除可见的小碎片。
2．植物组织中存在有大量的多酚、多糖、色素、次生代谢产物，如果需要除去植物蛋白样品中残存的色素等杂质，可以在最后得到的上清液中加入5倍体积的冷丙酮或冷甲醇，混匀后-20℃放置1 小时或过夜，然后4℃12,000 rpm 离心10 min，弃上清后室温风干，然后将样品溶于自备的后续实验缓冲液中即可。经过此纯化处理后，部分蛋白质可能会发生变性，不能再用于活性检测。