BTN90903 无RNase的DNase溶液

无RNase的DNase溶液说明书
产品编号：BTN90903
规格：300U
产品及特点：
本产品是从牛胰DNase中精制的无RNase污染的DNase，专门用于降解RNA样品中的DNA污染，具有下列特点：
1. 高效，能使总RNA中的基因组DNA污染降低到电泳检测不到的水平。
2. 同时降解单链DNA和双链DNA。
3. 不含RNase，可以保证RNA分子完整性不受任何影响。
4. 反应条件经过优化，可以用于快速降解硅胶膜上吸附的DNA，也可以用于快速降解液体反应体系中的DNA。
5. 可以用于总RNA提取和体外转录中去除DNA。也可用于切口平移（Nick Translation）和DNase印迹法研究DNA-蛋白质相互作用。
规格及成分：

成分	规格
RNase-free DNase（1U/μL）	300μl
10×DNase Buffer	300μl
50 mM EDTA溶液	300μl
说明书	1份

保存条件：
低温运输，-20℃保存，有效期一年。
自备试剂：
超纯水。
使用方法：
一、去除RNA样品中污染的基因组DNA（仅供参考，本试剂盒不含RNase-free DNase以外的所需试剂）
1. 在一无RNA酶的离心管中配制50 μl的反应液：

成分	用量
RNA样品	1μg
10×DNase Buffer	1μl
RNase-free DNase（1U/μL）	1μl
自备的RNase inhibitor（40U/μL）	0.5-1μL (可不加)
补超纯水到	10μL

2. 混匀，短暂离心，37℃放置30分钟；
3. 加入2 μL 50 mM EDTA溶液，65℃放置15分钟。此步可以灭活DNase。RNA在加热时容易水解，也可以使用酚/氯仿抽提去除DNase，然后再乙醇沉淀RNA。如果RNA在20μg以上，也可以使用本公司的RNAclean
试剂盒进行柱式纯化，回收 RNA。
4. 电泳检测是否去除了基因组 DNA，然后进行后续实验。
二、除去硅胶膜离心吸附柱上的 DNA（仅供参考，本试剂盒不含 RNase-free DNase 以外的所需试剂）
1. 在柱式法提取过程中，完成洗涤步骤。
2. 配制 50 μL DNase 工作液。

成分	用量
10×DNase Buffer	5μl
RNase-free DNase（1U/μL）	10μl
自备的RNase inhibitor（40U/μL）	0.5-1μL (也可不加)
补超纯水到	50μL

3. 加在离心吸附柱中间，室温放置5-30分钟。
4. 加入0.5 mL 自备洗柱液洗涤两次。
5. 用RNA洗脱液洗脱即得无DNA的RNA样品。
三、除去RNA体外转录反应中的DNA模板（仅参考，本试剂盒不含RNase-free DNase以外的所需试剂）
1. 按2 U RNase-free DNase/μg DNA模板的比例在RNA体外转录反应中加入RNase-free DNase。注意：酶的最佳用量也许需要优化。
2. 37℃放置15分钟。
3. 加入2 μL 50 mM EDTA溶液，65℃放置15分钟；此步可以灭活DNase。RNA在加热时容易水解，也可以使用酚/氯仿抽提去除DNase，然后再乙醇沉淀RNA。如果RNA在20 μg以上，也可以使用本公司的RNAclean试剂盒（需另购）进行柱式纯化，回收RNA。
四、用于切口平移法（Nick Translation）DNA探针标记（仅供参考，本试剂盒不含RNase-free DNase以外的所需试剂）
1. 按下表设置切口平移标记反应：

成分	用量
10×DNA聚合酶I缓冲液	2.5μl
3 dNTP mixture，1mM each	1.25μl
标记核苷酸：非标记核苷酸混合（3：7，1mM）	1μl
RNase-free DNase（0.002 U/μL，见注）	1μl
DNA 聚合酶 I（10U/μL）	0.5-1.5μl
模板 DNA	0.25μg
加水到	25μl

注：稀释 RNase-free DNase 的缓冲液为 1×DNA 聚合酶 I 缓冲液：50 mM
2. 15℃放置 15-60 分钟。
3. 加入 10 μL 50 mM EDTA 溶液。
4. 65℃放置 15 分钟灭活酶。
5. 所得探针可以纯化后使用，也可以直接使用。