BTN91101 一管式TMB显色液

一管式TMB显色液说明书
产品编号：BTN91101
规格：100mL（A）/100mL（B）
产品及特点：
四甲基联苯胺，即TMB（3, 3′,5 ,5′-Tetramethylbenzidine），是辣根过氧化物酶（Horseradish Peroxidase、HRP）的显色底物，在辣根过氧化物酶和H2O2 存在时，TMB 会产生可溶性蓝色产物（光吸收在370nm），加入硫酸后，溶液呈黄色，此时可以在450nm 测定吸光度，因此TMB 和H2O2一起常用于检测HRP 的存在。跟HRP的其他底物（如ABTS 和OPD）相比，TMB不但灵敏，而且无毒，所以在ELISA 中的应用日趋广泛。传统的TMB显色试剂一般由两个组份组成（另一个是H2O2），必须在使用前新鲜配制，并且容易产生沉淀，使用相对不太方便，并且也容易导致操作误差。为克服这些缺点，本公司开发了只有一个溶液的一管式TMB 显色液，它具有下列特点：
1. 即开即用，操作简单，用户不需要配制任何溶液。
2. 显色液只是单一溶液，简化了操作步骤，降低了操作误差，结果更加稳定。
3. 既可用于ELISA 等的显色液，也可以用于检测血液或血红蛋白等样品中的过氧化物酶含量。
4. 该底物溶液含TMB、H2O2 和特殊的稳定剂，可以在4℃长期放置。
5. 分沉淀可溶型（A 型，适用于ELISA）和沉淀不可溶型（B 型，使用于Western 印迹膜免疫检测）两种。
规格及成分：

成分	A型	B型
本产品A 型（ELISA 专用）	100ml	无
本产品B 型(Western 专用)	无	100ml
说明书	1份	1份

保存条件：
常温运输、2-8℃避光保存，有效期一年。
自备试剂：
A 型：ELISA 相关试剂，TMB 终止液（1-2 M H2SO4）。
B 型：Western 印迹杂交相关试剂。
使用方法：
可溶型（A 型）使用方法：
1. 在酶标板的每个孔中直接加入100 μL 或150 μL 本产品（A 型）。
2. 室温温育5-30 分钟。
3. 向每个孔中加入100 μL 或150 μL 终止液。
将酶标板置于酶标仪中，450 nm 处读取数据。
沉淀型（B 型）使用方法：
1. 将已经用封堵液、一抗和二抗处理的Western 膜用自备的PBS 缓冲液洗涤一次。封堵液、一抗和二抗的处理同常规方法。
2. 将膜浸入本产品（B 型）中，室温摇晃5-30 分钟，并在颜色达到所需深度时候将Western 膜取出以终止反应。
疑难解答：
Q：在ELISA 底物反应过程中，为何有些孔呈蓝色，而另外的孔呈蓝绿色？
A: 这是TMB 底物反应过程中的正常现象，不影响实验结果。这是由于辣根过氧化物酶的浓度过高引起的，建议降低二抗的浓度。
Q：ELISA 显色时为何孔中会出现沉淀？
A：HRP 浓度过高，建议降低二抗-HRP 浓度或加入100 μL 冰醋酸以溶解沉淀。
Q：如何降低背景读数？
A：建议降低一抗或二抗浓度，延长封闭时间。