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BTN91202 两管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)
发布时间：2017-10-01 10:20 | 点击次数：243
两管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)说明书
产品编号：BTN91202
规格：50T
产品及特点：
本产品是经过精心优化的、基于MMLV 逆转录酶和Taq DNA 聚合酶的双酶一管式RT-PCR试剂盒，它含有除模版RNA 和其专一性引物以外的所有RT-PCR试剂，包括MMLV 逆转录酶、Taq DNA聚合酶、RT-PCR 缓冲液等，可以在同一反应管内完成RNA→cDNA→PCR 反应 (RT-PCR反应)，本产品特点如下：
1. 一管式完成RT-PCR 反应，避免样品交叉污染，尤其适合临床应用。
2. 即开即用，用户不需要单独准备RT-PCR 所需的各种试剂。
3. 主要成分只有两个RT-PCR buffer 和MMLV-Taq Mix，将加样步骤减少到最低，极大降低了加样误差，增加了可重复性。
4. 使用范围广，适用于从病毒RNA 到人RNA 的各种RNA 模板。
5. 高灵敏度，每个RT-PCR 体系最低可以检测200拷贝的RNA 分子，可扩增的模版RNA的最长达2000 nt。
6. 所得RT-PCR 产物可以直接用于AT 克隆。
格及成分：
保存条件：
低温运输，-20℃保存，有效期一年。
自备试剂：
1. RNA 模板：总RNA，mRNA。
2. 专一性引物和探针（引物、探针应用HPLC 或PAGE 纯化）。
3. RNase-free & DNase-free 的tip 头，离心管,薄壁PCR 管等。
4. 各种规格的移液器。
5. 常规或Real-time PCR 仪。本产品适用于下列Realtime PCR 仪：ABI PRISM7700、ABI PRISM 7500、ABI PRISM 7300、ABI PRISM 7000、MJ Opticon 、BIORAD iCycler 、Roch LightCycler 等，具体使用方法请参照相应仪器的说明书。
使用方法：
注意：所有离心管用前最好全部短暂离心几秒使管壁上溶液沉淀到管底。下面以一个30μL 体系的RT-PCR 为例，如果体积不同，各成分用量需要适当调节。
注：通常初次使用本试剂时，可用引物浓度300nM，探针浓度200nM 进行实验，根据实验结果具体情况，在200～800nM 范围内调整引物浓度，在50～400nM 范围内调整探针浓度以达到最佳检测效果。引物、探针、待检样品的具体加量用户可以根据实际情况调整，同时增减DEPC 水用量，保证总反应体积不变即可。
2. 轻柔混合均匀后放入PCR 仪中进行RT-PCR。
3. 设定RT-PCR 反应条件时，一般将RT 的条件设定成42℃ 30 分钟，后接94℃变性5 分钟，然后进入PCR 循环（PCR 参数将根据自备引物的Tm 值由用户自行决定注）、最后72℃ 5 分钟。对Realtime PCR，在复性步骤设置荧光检测，检测通道：FAM/HEX/VIC/ROX/CY5
4. RT-PCR 结束后取5-10 μL 电泳检查。
注意事项：
1. 使用已校准的移液器，选用一次性PCR 反应管、离心管、tip 头等进行样本处理及配液等操作，所有用具应不含DNA 酶和RNA 酶。
2. 引物、探针设计过程中应尽可能避免发夹结构、二聚体等现象的发生，探针的位置尽可能靠近上游引物, PCR 目标片段最好小于200bp，尽可能在150bp 以内。
3. 实验样品尽可能新鲜，提取过程应严防RNA 酶污染及操作不当导致的RNA 降解。
4. 使用本产品时建议对RT-PCR 扩增条件、引物浓度和样品用量进行调整，选择最适当的引物浓度、样品浓度和PCR 扩增条件。
5. 本产品使用前应在室温充分融解，并用漩涡震荡器充分混匀。
6. 统一配液后分装以减少加样误差，每次实验应设置阴性对照。
7. 禁止标记PCR 反应管，避免外源性荧光信号干扰。
8. PCR 反应管中不能有气泡，否则会产生非特异的荧光信号。若有气泡，可先用手指将气泡弹破，然后再低速离心消除。
9. 实时荧光PCR 仪器连续进行实验时，最好间隔一小时以上再使用。
10. 实时荧光PCR 仪需经常校正和清洁载样板板孔。
11. 若使用Roch LightCyclerTM 荧光PCR 仪，应将毛细管放在专门套管中，以便分装反应体系和加入待检样品。前述操作完毕应低速离心数秒再将毛细管垂直缓慢放入样品架，以免折断；若发生折断，应小心取出，用专用小毛刷擦拭干净后方可进行扩增。
12. 实验室应严格分区，避免PCR 产物污染。
产品编号：BTN91202
规格：50T
产品及特点：
本产品是经过精心优化的、基于MMLV 逆转录酶和Taq DNA 聚合酶的双酶一管式RT-PCR试剂盒，它含有除模版RNA 和其专一性引物以外的所有RT-PCR试剂，包括MMLV 逆转录酶、Taq DNA聚合酶、RT-PCR 缓冲液等，可以在同一反应管内完成RNA→cDNA→PCR 反应 (RT-PCR反应)，本产品特点如下：
1. 一管式完成RT-PCR 反应，避免样品交叉污染，尤其适合临床应用。
2. 即开即用，用户不需要单独准备RT-PCR 所需的各种试剂。
3. 主要成分只有两个RT-PCR buffer 和MMLV-Taq Mix，将加样步骤减少到最低，极大降低了加样误差，增加了可重复性。
4. 使用范围广，适用于从病毒RNA 到人RNA 的各种RNA 模板。
5. 高灵敏度，每个RT-PCR 体系最低可以检测200拷贝的RNA 分子，可扩增的模版RNA的最长达2000 nt。
6. 所得RT-PCR 产物可以直接用于AT 克隆。
格及成分：
| 成分 | 规格 |
| 双酶一管式RT-PCR Buffer（2×） | 750μl |
| MMLV-Taq Mix | 100μl |
| RNase-free水 | 1ml |
| 说明书 | 1份 |
低温运输，-20℃保存，有效期一年。
自备试剂：
1. RNA 模板：总RNA，mRNA。
2. 专一性引物和探针（引物、探针应用HPLC 或PAGE 纯化）。
3. RNase-free & DNase-free 的tip 头，离心管,薄壁PCR 管等。
4. 各种规格的移液器。
5. 常规或Real-time PCR 仪。本产品适用于下列Realtime PCR 仪：ABI PRISM7700、ABI PRISM 7500、ABI PRISM 7300、ABI PRISM 7000、MJ Opticon 、BIORAD iCycler 、Roch LightCycler 等，具体使用方法请参照相应仪器的说明书。
使用方法：
注意：所有离心管用前最好全部短暂离心几秒使管壁上溶液沉淀到管底。下面以一个30μL 体系的RT-PCR 为例，如果体积不同，各成分用量需要适当调节。
- 在一干净的无RNase 的PCR 管中，先加入下列成分：
| 成分 | 阴性对照 | 样品 |
| RNA 模板（自备，分下面三种情况） | 无 | 见下 |
| 总RNA | 无 | 100-500 ng |
| 或poly(A) mRNA | 无 | 10-500 ng |
| 或体外转录得到的专一RNA | 无 | 0.01 pg-500ng |
| RNA 特异性引物一（自备） | 终浓度300nM | 终浓度300nM |
| RNA 特异性引物二（自备） | 终浓度300nM | 终浓度300nM |
| 探针（仅对Realtime RT-PCR） | 终浓度200nM | 终浓度200nM |
| RNase-free水 | 补到13μL | 补到13μL |
| 双酶一管式RT-PCR Buffer（2×） | 15μl | 15μl |
| MMLV-Taq Mix | 2μl | 2μl |
2. 轻柔混合均匀后放入PCR 仪中进行RT-PCR。
3. 设定RT-PCR 反应条件时，一般将RT 的条件设定成42℃ 30 分钟，后接94℃变性5 分钟，然后进入PCR 循环（PCR 参数将根据自备引物的Tm 值由用户自行决定注）、最后72℃ 5 分钟。对Realtime PCR，在复性步骤设置荧光检测，检测通道：FAM/HEX/VIC/ROX/CY5
4. RT-PCR 结束后取5-10 μL 电泳检查。
注意事项：
1. 使用已校准的移液器，选用一次性PCR 反应管、离心管、tip 头等进行样本处理及配液等操作，所有用具应不含DNA 酶和RNA 酶。
2. 引物、探针设计过程中应尽可能避免发夹结构、二聚体等现象的发生，探针的位置尽可能靠近上游引物, PCR 目标片段最好小于200bp，尽可能在150bp 以内。
3. 实验样品尽可能新鲜，提取过程应严防RNA 酶污染及操作不当导致的RNA 降解。
4. 使用本产品时建议对RT-PCR 扩增条件、引物浓度和样品用量进行调整，选择最适当的引物浓度、样品浓度和PCR 扩增条件。
5. 本产品使用前应在室温充分融解，并用漩涡震荡器充分混匀。
6. 统一配液后分装以减少加样误差，每次实验应设置阴性对照。
7. 禁止标记PCR 反应管，避免外源性荧光信号干扰。
8. PCR 反应管中不能有气泡，否则会产生非特异的荧光信号。若有气泡，可先用手指将气泡弹破，然后再低速离心消除。
9. 实时荧光PCR 仪器连续进行实验时，最好间隔一小时以上再使用。
10. 实时荧光PCR 仪需经常校正和清洁载样板板孔。
11. 若使用Roch LightCyclerTM 荧光PCR 仪，应将毛细管放在专门套管中，以便分装反应体系和加入待检样品。前述操作完毕应低速离心数秒再将毛细管垂直缓慢放入样品架，以免折断；若发生折断，应小心取出，用专用小毛刷擦拭干净后方可进行扩增。
12. 实验室应严格分区，避免PCR 产物污染。