BTN91203 一步式胞浆蛋白微量制备试剂盒

一步式胞浆蛋白微量制备试剂盒说明书
产品编号：BTN91203
规格：30T/100T
产品及特点：
DNA 只存在于细胞核内，因此参与转录调节和DNA 复制的蛋白质主要存在于细胞核中，要研究蛋白质与DNA 的相互作用，首先需要制备能够与DNA 作用的天然细胞核蛋白质。目前、细胞核蛋白质制备方法一般都比较繁琐，一次处理大量样品时尤其不便，为此本公司开发了本产品，用于从哺乳动物组织和培养细胞核蛋白的微量提取，它具有下列特点：
1. 提取制备过程简便，只需要一小时。
2. 实验重复性好，尤其适合同时处理多个样品。
3. 可用于培养的动物细胞，也可以用于组织细胞。
4. 制备的核蛋白能保持天然活性，可以直接用于转录因子活性分析、凝胶阻滞实验(gel shift assay)、免疫共沉淀、Western Blotting、DNA 足迹图实验和甲基化干扰实验酶活性测定等研究。
规格及成分：

成分	30T	100T
溶液A	15ml	50ml
说明书	1份	1份

保存条件：
低温运输，4℃保存，有效期一年。
自备试剂：
PBS缓冲液，PMSF溶液，DTT溶液。
使用方法：
1、对贴壁细胞：将5×10^5-7个细胞培养到覆盖率为55-65%，吸弃培养基，用自备的预冷PBS 缓冲液洗涤细胞一次，将细胞从壁上小心刮下，转移到预冷的塑料离心管中，4℃ 3000 rpm 离心5 分钟，小心弃上清。直接进入第三步进行后续处理。
2、对悬浮细胞：直接将5×10^5-7个的悬浮细胞转移到1.5 mL 预冷的塑料离心管中，4℃ 3000 rpm 离心5 分钟，用自备的预冷的PBS 洗涤细胞沉淀一次，3000 rpm 离心5 分钟，小心弃上清。直接进入第三步处理细胞沉淀。
说明：悬浮细胞制备胞浆的效果一般好于贴壁细胞。
3、在细胞沉淀中加入相当于沉淀细胞体积5 倍或更多的预冷的溶液A 重悬细胞，一般不超过300 uL-500 uL 溶液A。溶液A 在临用前最好加入终浓度为0.2mM 的PMSF 和1mM 的DTT。PMSF 和DTT 在水溶液中都不稳定，只能临用提加入。
4、冰浴静置10 分钟。
5、将细胞转移到预冷的15 mL 的Dounce 或Potter 玻璃匀浆器中（温和破裂细胞用），上下匀浆10-15 次（为检查效果，可取少量裂解物与自备的0.01%Trypan Blue 溶液混合，在显微镜下观察，只有破裂细胞的细胞核才能染色，完整细胞无色。如果需要，可增加匀浆次数直到80-90%以上的细胞裂解为止）。
6、小心转移到预冷的离心管中，4℃ 17000g 离心15 分钟，线粒体，细胞核等细胞器将沉淀到管底。
保留上清（胞浆部分）待用。