BTN100303 玻璃珠法柱式真菌DNA提取试剂盒

玻璃珠法柱式真菌DNA提取试剂盒说明书
产品编号：BTN100303
规格：5T
产品及特点：
真菌DNA提取是一个难题，一是因为真菌有菌丝体、孢子等多种完全不同的结构形态，二是因为其细胞壁一般都很厚，比较难以破碎。本产品是液氮研磨法柱式真菌DNA提取试剂盒的姊妹产品，它利用玻璃珠法破碎细胞，主要用于从真菌孢子和液体培养的真菌细胞中提取DNA（液氮研磨法柱式真菌DNA提取试剂盒采用液氮研磨法破碎细胞，适用于从真菌菌丝体中提取其基因组DNA）。本产品具有下列特点：
1. 即开即用，提供包括玻璃珠、离心吸附柱在内的所有试剂和耗材。
2. 采用玻璃珠法破碎细胞，属于物理方法，远比基于蜗牛酶或破壁酶的温和化学破壁法重复性好，也不容易带入外援真菌DNA。
3. 本方法提取一个样品只需要10余分钟，方便、快速和高效。
4. 一次可以处理5 mL的过夜真菌培养物，所得的基因组DNA OD260/OD280一般都在1.8左右，长度一般在20 kb左右，每mL菌液的DNA产率一般在1-3ug。可以直接用于PCR和酶切等后续试验。
规格及成分：

成分	5T（A型）
溶液A	25ml
溶液B	25ml
溶液C	75ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液2.0	10ml
酸洗玻璃珠，400μm	25g
说明书	1份

保存条件：
常温运输及保存，保存期为一年。
使用方法：
1. 对菌液：取3-5 mL过夜培养的真菌菌液 (OD600一般在1以上)到干净的塑料离心管中，12000 rpm离心2分钟弃上清留沉淀。
2. 对菌落：用接种针在在培养基上刮取尽可能多的真菌菌落（约50mg），转移到装有1mL水的干净的塑料离心管中，洗涤下接种环上的菌体。12000 rpm离心2分钟弃上清留沉淀。
3. 对孢子材料，一般取0.1g左右，直接加入到离心管中，然后进入下一步操作。
4. 在材料中加入无菌水1mL，振荡半分钟后12000rpm离心2分钟弃上清留沉淀。
5. 沉淀中加入500 μL溶液A和0.5克的玻璃珠，涡旋震荡10分钟。
6. 加入500μL的溶液B，涡旋震荡3分钟，12000rpm离心2分钟，将上清液全部转移到一个5mL的干净的塑料离心管中。或者每管0.3mL，分别转移到2-3个1.5mL的干净的塑料离心管中。
7. 在上清中加入3倍体积的溶液C，颠倒数次混匀后，分三次上离心吸附柱，每次上柱后均先室温放置2分钟，然后12000rpm离心1分钟，倒掉穿透液，再第二次上柱，重复上面的操作，直到挂柱步骤完成。
8. 在离心吸附柱中加入500 μL通用洗柱液，12000rpm离心1分钟，倒掉穿透液。
9. 重复上步操作一次。
10.12000rpm空柱离心1分钟。
11. 加入50-100 μL DNA洗脱液2.0，室温放置1分钟以上，12000rpm离心1分钟，穿透液即为真菌DNA样品。
12. 为了得到更多的DNA样品，可以重复上步操作1-2次。
13. 所得DNA即可立即使用或放冰箱长期保存。