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BTN100410 超快转染试剂盒
发布时间：2017-10-01 10:29 | 点击次数：275
超快转染试剂盒说明书
产品编号：BTN100410
规格：1.5ml
产品及特点：
本产品是阳离子转染试剂，具有高效、低毒和易于使用等优点，对多种类型的细胞核培养板都具有高转染效率，适用于贴壁细胞和悬浮细胞（哺乳动物细胞系）的转染。本产品具有下列特点：
1. 转染的时候血清的存在不影响转染效率。
2. 毒性低，细胞存活率高。转染后无需立即去除转染试剂，可在4-6小时后去除。
3. 对多数细胞具有很高的转染效率。
规格及成分：
保存条件：
低温运输和2-8℃保存，请千万不要冻凝！保存期为一年。
重要提示：
1、可以使用Opti-MEMI 或DMEM 来稀释质粒DNA 或本转染试剂。如果用其他无血清培养基稀释，需要做预实验。
2、转染过程中，在培养基中不要加入抗生素，以免细胞死亡。
3、由于一些无血清复合物（如CD239、SFM II、VP-SFM）会抑制阳离子脂质体介导的转染，因此有必要检测一下无血清培养基和LipofectamineTM 2000 的相容性。
使用方法：
一、在24 孔板中转染哺乳动物细胞（对于其他类型的细胞板，请参考本手册的第二部分），对每个转染样品，请按下面方法准备：
1、对贴壁细胞：转染前18-24小时，接种适量的细胞(一般需要0.5-2*10E5个细胞)到含有0.5mL 无抗菌素培养基的细胞孔中，以保证转染时细胞密度达到80-90%。对悬浮细胞：转染时使一个细胞孔中的0.5mL 无抗菌素培养基中所含的细胞数量达到4-8*10E5 个即可。注意：为获得最高转染效率并尽可能降低细胞毒性，建议转染时贴壁细胞密度最好在80-90%。此外，在实验过程中需要保证相同的接种条件。
2、将适量的质粒DNA（比如0.5-1 μg）加入到25μl 的Opti-MEMI 低血清培养基（或其他无血清培养基），得到所需浓度，混合均匀并室温放置待用。注意：对每个孔有0.5-2*10E5 个细胞的24 孔细胞板而言，一次（即每孔）转染实验的质粒DNA 用量的推荐用量为0.5-1 μg。
3、使用前轻轻混匀本转染试剂，取所需量（如1-3μl）到25μl 的Opti-MEMI低血清培养基（或其他无血清培养基）中，混合均匀并室温放置待用。注意：对大多数细胞系而言，一个细胞孔所需本产品的推荐用量为1-3μl。
45分钟后（最长不要超过30 分钟，如果使用DMEM 稀释本转染试剂，最长不要超过10 分钟）将第2 步稀释的质粒DNA 和第3 步的转染试剂混合。混合液看起来可能会比较浑浊。注意：混合液中DNA（in μg）和本产品（inμl）的比例最好为1:2 或1:3，但对个别细胞系，最佳用量可能需要优化。
4、混合后体积共50μl，室温放置20 分钟以让DNA 和转染试剂形成复合体。该复合体在室温下可以稳定5 小时。
5、将 50μl 混合液全部加入到一个细胞孔中，轻柔摇晃24 孔板使混合液和培养细胞混匀。
6、将细胞板移至37℃/5%CO2 孵箱中培养适当时间待用（见下面两步），然后再检查转染基因的表达。备注：无需在转染后4-6 小时换液，但4-6 小时后换液也不会降低转染效率。
7、对贴壁细胞，转染24 小时后以1:10 或更高的比例传代到新鲜的培养基中，次日再加入筛选用的抗菌素，再根据实验需要进行后续的分析。
8、对悬浮细胞，转染4 小时后进行表达分析。如果需要可以在培养基中加入PMA或PHA 以便提高CMV 启动子的活性。
二、非24 孔板转染体系
1、可根据培养面积按比例调整质粒DNA，本产品，细胞量和培养基体积（参见下表）。对于自动化、大规模96 孔板体系，建议混合大体积的转染复合体，先加入到细胞孔中，然后再将悬浮细胞直接加入到含有转染复合体的细胞孔中实现快
速操作，只是加入的悬浮细胞的密度应为上述转染操作的2 倍。在有转染试剂存在时，细胞仍然可以贴壁。
2、下列数据以单孔为准，单孔面积的单位是cm2，相对面积是跟24孔板的一个空比较
注意：表面积是根据培养容器的实际测量得到，但也会根据容器生产商的不同发生变化。
三、转染条件的优化
可通过调整质粒DNA、本产品的浓度、细胞密度以获得最高转染效率和降低对细胞的非特异性影响。确保细胞密度达到80%以上。DNA (μg)与本产品(uL)比例可在1:0.5 到1:5 范围内调整。
产品编号：BTN100410
规格：1.5ml
产品及特点：
本产品是阳离子转染试剂，具有高效、低毒和易于使用等优点，对多种类型的细胞核培养板都具有高转染效率，适用于贴壁细胞和悬浮细胞（哺乳动物细胞系）的转染。本产品具有下列特点：
1. 转染的时候血清的存在不影响转染效率。
2. 毒性低，细胞存活率高。转染后无需立即去除转染试剂，可在4-6小时后去除。
3. 对多数细胞具有很高的转染效率。
规格及成分：
| 成分 | 规格 |
| BTN100410 | 1.5ml |
| 说明书 | 1份 |
低温运输和2-8℃保存，请千万不要冻凝！保存期为一年。
重要提示：
1、可以使用Opti-MEMI 或DMEM 来稀释质粒DNA 或本转染试剂。如果用其他无血清培养基稀释，需要做预实验。
2、转染过程中，在培养基中不要加入抗生素，以免细胞死亡。
3、由于一些无血清复合物（如CD239、SFM II、VP-SFM）会抑制阳离子脂质体介导的转染，因此有必要检测一下无血清培养基和LipofectamineTM 2000 的相容性。
使用方法：
一、在24 孔板中转染哺乳动物细胞（对于其他类型的细胞板，请参考本手册的第二部分），对每个转染样品，请按下面方法准备：
1、对贴壁细胞：转染前18-24小时，接种适量的细胞(一般需要0.5-2*10E5个细胞)到含有0.5mL 无抗菌素培养基的细胞孔中，以保证转染时细胞密度达到80-90%。对悬浮细胞：转染时使一个细胞孔中的0.5mL 无抗菌素培养基中所含的细胞数量达到4-8*10E5 个即可。注意：为获得最高转染效率并尽可能降低细胞毒性，建议转染时贴壁细胞密度最好在80-90%。此外，在实验过程中需要保证相同的接种条件。
2、将适量的质粒DNA（比如0.5-1 μg）加入到25μl 的Opti-MEMI 低血清培养基（或其他无血清培养基），得到所需浓度，混合均匀并室温放置待用。注意：对每个孔有0.5-2*10E5 个细胞的24 孔细胞板而言，一次（即每孔）转染实验的质粒DNA 用量的推荐用量为0.5-1 μg。
3、使用前轻轻混匀本转染试剂，取所需量（如1-3μl）到25μl 的Opti-MEMI低血清培养基（或其他无血清培养基）中，混合均匀并室温放置待用。注意：对大多数细胞系而言，一个细胞孔所需本产品的推荐用量为1-3μl。
45分钟后（最长不要超过30 分钟，如果使用DMEM 稀释本转染试剂，最长不要超过10 分钟）将第2 步稀释的质粒DNA 和第3 步的转染试剂混合。混合液看起来可能会比较浑浊。注意：混合液中DNA（in μg）和本产品（inμl）的比例最好为1:2 或1:3，但对个别细胞系，最佳用量可能需要优化。
4、混合后体积共50μl，室温放置20 分钟以让DNA 和转染试剂形成复合体。该复合体在室温下可以稳定5 小时。
5、将 50μl 混合液全部加入到一个细胞孔中，轻柔摇晃24 孔板使混合液和培养细胞混匀。
6、将细胞板移至37℃/5%CO2 孵箱中培养适当时间待用（见下面两步），然后再检查转染基因的表达。备注：无需在转染后4-6 小时换液，但4-6 小时后换液也不会降低转染效率。
7、对贴壁细胞，转染24 小时后以1:10 或更高的比例传代到新鲜的培养基中，次日再加入筛选用的抗菌素，再根据实验需要进行后续的分析。
8、对悬浮细胞，转染4 小时后进行表达分析。如果需要可以在培养基中加入PMA或PHA 以便提高CMV 启动子的活性。
二、非24 孔板转染体系
1、可根据培养面积按比例调整质粒DNA，本产品，细胞量和培养基体积（参见下表）。对于自动化、大规模96 孔板体系，建议混合大体积的转染复合体，先加入到细胞孔中，然后再将悬浮细胞直接加入到含有转染复合体的细胞孔中实现快
速操作，只是加入的悬浮细胞的密度应为上述转染操作的2 倍。在有转染试剂存在时，细胞仍然可以贴壁。
2、下列数据以单孔为准，单孔面积的单位是cm2，相对面积是跟24孔板的一个空比较
| 培养皿 | 单孔面积 | 相对面积 | 培养基体积 | DNA 制备 | 本试剂制备 |
| 96 孔板 | 0.3 | 0.2 | 100μl | 0.2μg in 25μl | 0.5μl in 25μl |
| 24 孔板 | 2 | 1 | 500μl | 0.5μg in 25μl | 1.5μl in 25μl |
| 12 孔板 | 4 | 2 | 1 mL | 1 μg in 50μl | 3.0μl in 50μl |
| 35 mm | 10 | 5 | 2 mL | 2.5 μg in 250μl | 7.5μl in 250μl |
| 6 孔板 | 10 | 5 | 2 mL | 2.5 μg in 250μl | 7.5μl in 250μl |
| 60 mm | 20 | 10 | 5 mL | 5.0 μg in 0.5 mL | 15μl in 0.5 mL |
| 10 cm | 60 | 30 | 15 mL | 15 μg in 1.5 mL | 45μl in 1.5 mL |
三、转染条件的优化
可通过调整质粒DNA、本产品的浓度、细胞密度以获得最高转染效率和降低对细胞的非特异性影响。确保细胞密度达到80%以上。DNA (μg)与本产品(uL)比例可在1:0.5 到1:5 范围内调整。