BTN100825 自诱导培养基(lac启动子)

自诱导培养基(lac启动子)说明书
产品编号：BTN100825
规格：200ml
产品及特点：
本产品是本产品是在pET 专用生长培养基的基础上开发而成的，它利用E.coli自身对培养基中不同碳源的调控利用机制，实现外源蛋白在细菌达到饱和生长期后的自动诱发。本产品具有下列特点：
1. 本产品自动诱导表达，不需要添加任何IPTG 或相关诱导物，节约成本。
2. 免去了密切监控菌液密度的过程，尤其适合大规模筛选。
3. 极大将细菌的生长密度OD600从2左右提高20以上。
4. 极大提高外源蛋白的表达量，最高可占细菌总蛋白的45%。
5. 与各种细胞培养容器（如培养瓶、培养罐、深孔管、发酵罐等）兼容。
6. 本产品即开即用，非常方便。
7. 适用于T7 RNA 聚合酶基因由lac启动子控制的任何表达系统，如pET系列。
8. 不适用于lacZ或lacY突变的宿主菌。
规格及成分：

成分	规格
成分A	200ml
成分B	1.25ml
说明书	1份

保存条件：
常温运输及保存，有效期两年。
自备试剂：
蒸馏水。
使用方法：
一：培养基的配制

• 配制自诱导培养基：将1.25 mL 溶液B 全部加入到200 mL 的溶液A 中即得自诱导培养基。

注意：必须严格无菌操作，否则自诱导培养基非常容易长细菌。
2. 贴好标签待用。如果长期时间不用，可以冻存在-20℃。
二：培养基的使用
1. 将构建好的质粒转化入细菌，如BL21（DE3），涂于自备的、含有1%葡萄糖的LB 培养基中（需要加入适当浓度的抗菌素），37℃培养过夜。
2. 挑取单个细菌接种到自备的、含适当浓度抗菌素的液体LB 培养基中，37℃培养直到菌液浑浊但不饱和（一般需要6-8 小时）。
3. 将所得菌液按千分之一的体积比例加入自诱导培养基中（如果自诱导培养基体积是100 mL，则加入100 μL 菌液），同时加入适当的抗菌素。注意：在自诱导培养基中，如果使用卡拉霉素，其终浓度比一般的培养基高，需要100 ug/mL。由于本方法所得菌液密度大，故需要大量氧气，因此培养基的体积不能超过三角瓶的五分之一。三角瓶底最好是皱褶式的，这样摇晃中氧气供应更充分。
4. 37℃培养过夜，或37℃培养到菌液饱和时降低摇床的温度到所需温度（对温度诱导型启动子）。
5. 收集菌液开始蛋白纯化步骤。