BTN100942 单孢子全基因组扩增试剂盒

单孢子全基因组扩增试剂盒说明书
产品编号：BTN100942
规格：30T
产品及特点：
本产品是用于从单个真菌孢子中扩增全基因组的试剂盒（此产品需自行分离单孢子）。本产品有如下优点：
1. 可以直接用孢子进行全基因扩增，避免了提取孢子DNA 过程中的样品损失。
2. 即开即用，不需要单独准备所需试剂。
3. 基于phi29 DNA聚合酶的高保真性、高合成率和超强链取代能力，具有高保真高产量的特点，可以扩增单个孢子基因组达上万倍。
4. 适用于各种真菌孢子样品。
5. 产物可用于多种后续试验，包括酶切、克隆、文库构建、测序、基因芯片分析等。
格及成分：

成分	规格
裂解液	75μl
WGA 溶液A	150μl
WGA 溶液B	300μl
Phi 29 DNA 聚合酶（10U/μL）	15μl
说明书	1份

保存条件：
低温运输、-20℃保存, 有效期一年。
自备试剂：
超纯水（无DNA 和DNase 污染）。
使用方法：
一、破碎真菌孢子细胞壁
1. 将单个孢子转入2.5 μL裂解液中，并且在显微镜下用微型针刺破细胞壁，90℃保温10分钟。
2. 加入5 μL WGA溶液A和2.5 uL超纯水，即可直接用于WGA。
二、WGA反应
1. 在上步得到的10 μL破碎了细胞壁的孢子样品中（已经加入了5μL WGA溶液A），加入10μL WGA溶液B，轻柔吹打混合均匀。
2. 加入0.5 μL Phi 29 DNA聚合酶（10U/μL），轻柔吹打混合均匀。
3. 30℃保温3-12小时。最好使用PCR仪进行30℃保温并打开热盖保温。如果采用30℃水浴，最好在样品管中加入30-50 μL石蜡油以防水分蒸发，因为30℃长时间的水浴也能使水分蒸发到管壁，从而改变反应体系中各成分的浓度、降低WGA反应效率。如果模板DNA量比较高，WGA三小时即可检测到DNA扩增。
4. 65℃保温10分钟使phi29 DNA聚合酶灭活。注：由于phi29 DNA聚合酶有DNA外切活性，所以最好将其灭活以免干扰后续反应。
5. 立即取3-5 μL WGA反应液进行电泳检测扩增效果。注意：WGA缓冲液中不含有甘油和电泳染料，所以需要先加上样缓冲液。
6. 扩增的DNA可以用于后续试验或冰箱长期保存。