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BTN101001 Benzonase核酸酶
发布时间：2017-10-01 10:57 | 点击次数：354
Benzonase核酸酶说明书
产品编号：BTN101001
规格：500U
产品及特点：
Benzonase 是由粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens）分泌的、由两个大小为26 kD 的亚基组成的一种广谱核酸酶，由Benzon 公司最先商品化，故名Benzonase。其活力比DNase I 强34 倍，能以相同的效率酶切单联和双链DNA 和RNA，将其消化成3-5 碱基长度（杂交限度以下）的5’-单磷酸寡核苷酸。其活性需要Mg2+，最佳pH 在6-10 之间，最适温度在35-44℃。
本产品是在野生型的Benzonase 的基础上经过基因工程改进而得，它具有下列特点：
1. 微量本产品就能高效降解所有形式（包括单链，双链，线性和环状）的DNA 和RNA，尤其适合从细胞裂解物中去除核酸，降低样品粘度而不影响蛋白电泳图谱。
2. 在有变性剂存在的条件下（如4M 尿素）还有活性，可以直接加入很多蛋白裂解液中。
3. 降解核酸完全，符合FDA 关于核酸污染的处理规程，可以用于工业生产。
4. 可以用于蛋白提取、2D凝胶电泳、Western Blot、免疫沉淀等实验。
规格及成分：
酶储备液的配方是：50 mM Tris-HCl pH 8.0，20 mM NaCl，2mM MgCl2，50%甘油。
酶单位定义：在标准反应体系内30 分钟内使OD260 改变1.0 的酶量，相当于彻底降解37μgDNA 的酶量。标准反应体系是： 1mg/mL 的超声打断的DNA 片段，50 mM Tris-HCl pH8.0， 0.1mg/mL BSA, 1mM MgCl2，37℃保温。
保存条件：
低温运输、-20℃保存，有效期两年。注意：不能放在-70℃保存。
使用方法：
一、酶的稀释
本产品浓度为1 U/uL，如果需要稀释Benzonase，需要自备酶稀释液，稀释液的配方是：50 mM Tris-HCl pH8.0，20 mM NaCl，2 mM MgCl2。
在稀释液中的Benzonase 只能在4℃放置数天。
二、用于去除核酸的标准试验（用户可以以此为参考设计自己的实验）将500 ng 鲑鱼精DNA 溶解在50 mM Tris-HCl pH8.0，1 mM MgCl2，
0.1 mg/mL BSA 中，然后加入90U 的Benzonase，37℃保温4 小时，只剩下0.2 ng 可以杂交检测的DNA，如果23℃保温4 小时，只剩下0.5 ng可以杂交检测的DNA。如果0℃保温4 小时，只剩下1 ng 可以杂交检测的DNA。
三、用于降低E.coli 裂解液的粘度的标准试验（用户可以以此为参考设计自己的实验）
将7.5 g E.coli 悬浮于15 mL悬浮液（10 mM Tris-HCl pH 9.0，1 mMEDTA，6 mM MgCl2）中，加入适量的本产品，然后将悬浮液经过弗氏压碎器破碎后迅速置于0℃冰上。
客户可以根据下表自行选择加入本产品的量
答客问：
Q: 什么情况下应该使用Benzonase 核酸酶？
A: Benzonase 核酸酶的应用领域包括：降低样品粘度以利操作（例如重组蛋白纯化，哺乳动物细胞裂解特下游要求粘度较低等情况）：减少存放的外周血单核细胞（PBMC）的结块现象，蛋白复性前高质量包涵体的制备，去除带负电荷的核酸对双向SDS-PAGE 蛋白样品的影响。
Q: 怎样灭活Benzonase 核酸酶？如何去除？
A: 采用EDTA 螯合金属离子会可逆地抑制Benzonase 活性，极端条件会造成不可逆失活，例如100mM NaOH，70℃处理30 分钟等，Benzonase可以用色谱法从目的产物中分离出去，由于这种核酸内切酶极其稳定，建议在终产物中要求不含有核酸酶的应用中不要使用Benzonase。
Q: 我的Benzonase 核酸酶遗忘在桌上了，还能用吗？
A: 根据破坏性稳定性测试，Benzonase 核酸酶非常稳定，即使在37℃下孵育数月仍能保持>90%的活性。
Q: 我需要使用别的缓冲液，哪些条件是Benzonase 核酸酶必需的？哪些条件会降低它的活性？
A: Benzonase 核酸酶的活性需要1-2 mM Mg2+，而在单价阳离子浓度>50%，磷酸浓度>20 mM，硫酸铵浓度>25 mM 等情况下，Benzonase的活性会降低50%
Q: Benzonase 核酸酶与蛋白酶抑制剂混合物兼容吗？
A: 可以兼容，但是对于含有EDTA 配方的蛋白酶抑制剂混合物要特别小心，EDTA 浓度大于1mM 时会抑制Benzonase 的活性。
Q：我的目的蛋白不溶，需要进行变性条件纯化，Benzonase 核酸酶能在尿素环境消化核酸吗？
A: 实际上Benzonase 核酸酶在有尿素（浓度可达6M）的情况下会增加活性，在尿素浓度为6M 时活性先增加，随着时间处长活性又有降低。
尿素7M 时，Benzonase 核酸酶15 分钟后出现变性并失活。但是在酶失活前多数核酸已经降解了。如果Benzonase 核酸酶的原浓度较高时会部分补偿7M 尿素的影响。
产品编号：BTN101001
规格：500U
产品及特点：
Benzonase 是由粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens）分泌的、由两个大小为26 kD 的亚基组成的一种广谱核酸酶，由Benzon 公司最先商品化，故名Benzonase。其活力比DNase I 强34 倍，能以相同的效率酶切单联和双链DNA 和RNA，将其消化成3-5 碱基长度（杂交限度以下）的5’-单磷酸寡核苷酸。其活性需要Mg2+，最佳pH 在6-10 之间，最适温度在35-44℃。
本产品是在野生型的Benzonase 的基础上经过基因工程改进而得，它具有下列特点：
1. 微量本产品就能高效降解所有形式（包括单链，双链，线性和环状）的DNA 和RNA，尤其适合从细胞裂解物中去除核酸，降低样品粘度而不影响蛋白电泳图谱。
2. 在有变性剂存在的条件下（如4M 尿素）还有活性，可以直接加入很多蛋白裂解液中。
3. 降解核酸完全，符合FDA 关于核酸污染的处理规程，可以用于工业生产。
4. 可以用于蛋白提取、2D凝胶电泳、Western Blot、免疫沉淀等实验。
规格及成分：
| 成分 | 规格 |
| Benzonase 核酸酶(1U/μL) | 500μl |
| 说明书 | 1份 |
酶单位定义：在标准反应体系内30 分钟内使OD260 改变1.0 的酶量，相当于彻底降解37μgDNA 的酶量。标准反应体系是： 1mg/mL 的超声打断的DNA 片段，50 mM Tris-HCl pH8.0， 0.1mg/mL BSA, 1mM MgCl2，37℃保温。
保存条件：
低温运输、-20℃保存，有效期两年。注意：不能放在-70℃保存。
使用方法：
一、酶的稀释
本产品浓度为1 U/uL，如果需要稀释Benzonase，需要自备酶稀释液，稀释液的配方是：50 mM Tris-HCl pH8.0，20 mM NaCl，2 mM MgCl2。
在稀释液中的Benzonase 只能在4℃放置数天。
二、用于去除核酸的标准试验（用户可以以此为参考设计自己的实验）将500 ng 鲑鱼精DNA 溶解在50 mM Tris-HCl pH8.0，1 mM MgCl2，
0.1 mg/mL BSA 中，然后加入90U 的Benzonase，37℃保温4 小时，只剩下0.2 ng 可以杂交检测的DNA，如果23℃保温4 小时，只剩下0.5 ng可以杂交检测的DNA。如果0℃保温4 小时，只剩下1 ng 可以杂交检测的DNA。
三、用于降低E.coli 裂解液的粘度的标准试验（用户可以以此为参考设计自己的实验）
将7.5 g E.coli 悬浮于15 mL悬浮液（10 mM Tris-HCl pH 9.0，1 mMEDTA，6 mM MgCl2）中，加入适量的本产品，然后将悬浮液经过弗氏压碎器破碎后迅速置于0℃冰上。
客户可以根据下表自行选择加入本产品的量
| 本产品在裂解液中的浓度 | 得到不粘稠裂解液所需孵育时间 （不粘稠是以得到可滴落的E.coli裂解液为标准） |
| 0.24U/mL | ＞60min |
| 2.4U/mL | 15min |
| 8U/mL | 5min |
| 24.0U/mL | 1.25min |
Q: 什么情况下应该使用Benzonase 核酸酶？
A: Benzonase 核酸酶的应用领域包括：降低样品粘度以利操作（例如重组蛋白纯化，哺乳动物细胞裂解特下游要求粘度较低等情况）：减少存放的外周血单核细胞（PBMC）的结块现象，蛋白复性前高质量包涵体的制备，去除带负电荷的核酸对双向SDS-PAGE 蛋白样品的影响。
Q: 怎样灭活Benzonase 核酸酶？如何去除？
A: 采用EDTA 螯合金属离子会可逆地抑制Benzonase 活性，极端条件会造成不可逆失活，例如100mM NaOH，70℃处理30 分钟等，Benzonase可以用色谱法从目的产物中分离出去，由于这种核酸内切酶极其稳定，建议在终产物中要求不含有核酸酶的应用中不要使用Benzonase。
Q: 我的Benzonase 核酸酶遗忘在桌上了，还能用吗？
A: 根据破坏性稳定性测试，Benzonase 核酸酶非常稳定，即使在37℃下孵育数月仍能保持>90%的活性。
Q: 我需要使用别的缓冲液，哪些条件是Benzonase 核酸酶必需的？哪些条件会降低它的活性？
A: Benzonase 核酸酶的活性需要1-2 mM Mg2+，而在单价阳离子浓度>50%，磷酸浓度>20 mM，硫酸铵浓度>25 mM 等情况下，Benzonase的活性会降低50%
Q: Benzonase 核酸酶与蛋白酶抑制剂混合物兼容吗？
A: 可以兼容，但是对于含有EDTA 配方的蛋白酶抑制剂混合物要特别小心，EDTA 浓度大于1mM 时会抑制Benzonase 的活性。
Q：我的目的蛋白不溶，需要进行变性条件纯化，Benzonase 核酸酶能在尿素环境消化核酸吗？
A: 实际上Benzonase 核酸酶在有尿素（浓度可达6M）的情况下会增加活性，在尿素浓度为6M 时活性先增加，随着时间处长活性又有降低。
尿素7M 时，Benzonase 核酸酶15 分钟后出现变性并失活。但是在酶失活前多数核酸已经降解了。如果Benzonase 核酸酶的原浓度较高时会部分补偿7M 尿素的影响。