BTN101003 RAPD PCR试剂盒(含银染)

RAPD PCR试剂盒(含银染)说明书
产品编号：BTN101003
规格：100T
产品及特点：
RAPD（Random Amplified Polymorphic DNA）即随机扩增多态性DNA标记，它是建立在PCT（Polymerase Chain Reaction）基础之上的一种可对整个未知序列的基因组进行多态性分析的分子技术。它以基因组DNA为模板，以单个人工合成的随机多态核苷酸序列（通常为10个碱基对）为引物，在热稳定的DNA聚合酶（Taq酶）作用下，进行PCR扩增。扩增产物经琼脂糖或聚丙烯酰胺电泳分离、溴化乙锭染色后，在紫外透视仪上检测多态性。
本产品的特点如下:
1． 本产品包含后续的核酸银染试剂，免去了制备染色试剂的繁琐过程，使实验效率大大提高。
2． 本产品提供20条RAPD引物，可对基因组的DNA全部进行PCR扩增，以检测多态性。如需更多引物需要单独购买。
3． 扩增产物的多态性反映了基因组的多态性。
4． 适用于生物品种鉴定、系谱分析及进化关系研究。
规格及成分：

成分	规格
PCR MagicMix 2.0（含酶含染料）	1.5ml
RAPD引物（20种，10 pmol/uL）	50μl×20支
超快核酸银染试剂盒溶液A组分一（干粉）	2g
超快核酸银染试剂盒溶液A组分二，10×	100ml
超快核酸银染试剂盒溶液A组分三，10×	100ml
溶液B组分一，10×	100ml
超快核酸银染试剂盒溶液B组分二	5ml
说明书	1份

保存条件：
低温运输，-20℃保存，有效期一年。
自备试剂：
超纯水、DNA模板、去离子水。
使用方法：
一：模板DNA制备：
常规方法提取样品DNA（本试剂盒不提供相关试剂），每次扩增使用的模板DNA的量见下表。
二：PCR操作：
1.设置PCR反应（以30 uL的标准PCR反应体系为例）：在一干净的PCR管中，加入下列成分：

PCR MagicMix 2.0	15μl
DNA模板(自备)
哺乳动物基因组DNA	0.5-1μg
酵母基因组DNA	5-500ng
细菌基因组DNA	0.5-50ng
RAPD引物20条之一	1μl
补超纯水到	30μl

2.放入PCR仪中进行PCR，PCR循环参数是：

PCR前变性	94℃ 2-4分钟
RAPD PCR	94℃ 30秒	循环40-42次
	45℃ 30秒
	72℃ 80秒
PCR后延伸	72℃ 10分钟

三：PAGE电泳检测PCR产物（步骤略，本试剂盒不提供相关试剂）
四：银染检测PAGE电泳结果
1.配制银染溶液A 100 mL
需要配制的溶液A（染色液）的体积完全跟PAGE胶的大小相关，一般的mini-PAGE胶需要20-30mL。下面的用量是针对配制100mL溶液A。如果配制的溶液A的体积不是100mL，则需按比例改变各成分用量。在一干净烧杯中加入下列成分搅拌混匀即可。溶液A需要新鲜配制。

成分	用量
自备的去离子水	80ml
超快核酸银染试剂盒溶液A成分一	0.2g
超快核酸银染试剂盒溶液A成分二	10ml
超快核酸银染试剂盒溶液A组分三	10ml

2.配制银染溶液B 100 mL
需要配制的溶液B（显色液）的体积完全跟PAGE胶的大小相关，一般的mini-PAGE胶需要20-30mL。下面的用量是针对配制100mL溶液B。如果配制的溶液B的体积不是100mL，则需按比例改变各成分用量。在一干净烧杯中加入下列成分搅拌混匀即可。溶液B需要新鲜配制。

成分	用量
自备的去离子水	89.5ml
超快核酸银染试剂盒溶液B成分一	10ml
超快核酸银染试剂盒溶液B组分二	0.5ml

3.染色
1.PAGE电泳结束后，将PAGE胶转移到装有去离子水的瓷盘中，漂洗2次，每次2分钟。此步用于洗去PAGE中的杂质，否则银染效率不高。
2.将PAGE胶转移到适当体积的溶液A，使溶液A在轻柔摇晃过程中能够淹没PAGE胶，室温染色时间10分钟。
3.倒掉溶液A，用自备的去离子水快速漂洗PAGE胶2次，每次半分钟。
4.将PAGE胶转移到适当体积的溶液B，使溶液B在轻柔摇晃过程中能够淹没PAGE胶。室温摇晃直到颜色显现，一般需要10分钟左右。
5.将PAGE胶置于适当背景下照相。