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BTN101005 即用型易错PCR试剂盒
发布时间：2017-10-01 10:58 | 点击次数：1343
即用型易错PCR试剂盒说明书
产品编号：BTN101005
规格：100T
产品及特点：
易错PCR（error-prone PCR）是利用Taq DNA多聚酶不具有3′→5′校对功能的特性，在一定条件下（如不同的dNTP浓度、Mg浓度和MnCl2存在）能够按较高的机率引入随机引入突变。如果有适当的选择方法，则可从构建的突变库选出所需突变体。
本产品就是专门为广大的研究工作者进行易错PCR而开发，本产品具有下列特点：
1. 即开即用，十分简单方便，尤其在生物制药和酶学研究领域显示出了它的优越性。
2. 配方经过精心优化，突变率稳定，突变没有趋向性。易错PCR的突变率为0.66%（±0.13%），详见使用手册疑难解答。
3. 比体内基因突变更快捷简单，但如果在PCR引物中设计位点，则可使产物克隆到表达载体，也可以用于体内蛋白活性的筛选。
4. 可用于连续易错PCR（sequential error-prone PCR），只需把上一次易错PCR的产物用作下一次易错PCR的模板即可，使每一次获得的小突变累积而产生重要的有益突变。
5. 只适用于扩增1kb以下的产物，对于1kb以上的产物，建议分段扩增。
规格及成分：
保存条件：
低温运输，-20℃保存, 有效期为一年。
自备试剂：
引物、DNA模板。
使用方法：
注：易错PCR一般不需要热启动，也不需要在PCR结束后做延伸处理。
循环次数与突变几率的关系
易错PCR循环次数决定每个核苷酸位置的突变几率，进而决定每个PCR产物可能得突变位点数，所以所需循环数由客户根据需要改动。
Q：易错PCR与定点突变PCR有什么区别？
A：定点突变是指通过聚合酶链式反应（PCR）等方法向目的DNA片段（可以是基因组，也可以是质粒）中引入所需变化（通常是表征有利方向的变化），包括碱基的添加、删除、点突变等。它需要预先知道靶基因的序列。易错PCR是一种随机突变，它不需要预先知道靶基因的序列（引物结合部分除外），但需要后续的筛选方法筛选自己所需要的突变。
Q：易错PCR的错误率是多少？
A：易错PCR的突变率为0.66%（±0.13%），对500 bp的PCR产物，相当于有4%的PCR片段为野生型，12%的含一个突变，20%的含两个突变，22%的含三个突变，18%的含四个突变，12%的含五个突变，12%的含六个或更多突变。
Q: 如果需要每个核苷酸有高于0.66%的突变率，如何办？
A: 可以使用连续多次易错PCR来提高突变率。但最好先用胶纯化回收PCR片段,再用于下一轮PCR。此外不能用少于千分之一的第一次PCR产物作为第二轮易错PCR的模板，否则多样性将受到影响。第三轮易错PCR最好使用所有第二轮的PCR产物作为模板，但需要在10mL体系中完成（可以分成很多100uL体系进行）。
产品编号：BTN101005
规格：100T
产品及特点：
易错PCR（error-prone PCR）是利用Taq DNA多聚酶不具有3′→5′校对功能的特性，在一定条件下（如不同的dNTP浓度、Mg浓度和MnCl2存在）能够按较高的机率引入随机引入突变。如果有适当的选择方法，则可从构建的突变库选出所需突变体。
本产品就是专门为广大的研究工作者进行易错PCR而开发，本产品具有下列特点：
1. 即开即用，十分简单方便，尤其在生物制药和酶学研究领域显示出了它的优越性。
2. 配方经过精心优化，突变率稳定，突变没有趋向性。易错PCR的突变率为0.66%（±0.13%），详见使用手册疑难解答。
3. 比体内基因突变更快捷简单，但如果在PCR引物中设计位点，则可使产物克隆到表达载体，也可以用于体内蛋白活性的筛选。
4. 可用于连续易错PCR（sequential error-prone PCR），只需把上一次易错PCR的产物用作下一次易错PCR的模板即可，使每一次获得的小突变累积而产生重要的有益突变。
5. 只适用于扩增1kb以下的产物，对于1kb以上的产物，建议分段扩增。
规格及成分：
| 成分 | 规格 |
| Taq DNA聚合酶（5U/uL） | 100μl |
| 易错PCR Mix，10× | 300μl |
| 易错PCR专用dNTP，10× | 300μl |
| MnCl2, 5mM | 300μl |
| 说明书 | 1份 |
低温运输，-20℃保存, 有效期为一年。
自备试剂：
引物、DNA模板。
使用方法：
- 以30 uL的标准PCR反应体系为例，如果反应体系不是30 uL，各成分需要等按比例增加或减少。在一干净的PCR管中，加入下列成分：
| 易错PCR Mix, 10× | 3μl |
| 易错PCR 专用dNTP, 10× | 3μl |
| MnCl2, 5mM | 3μl |
| 自备DNA模板（10ng/μL） | 1μl |
| PCR引物(自备，10 μM each) | 10 pmol each |
| Taq DNA聚合酶（5U/μL） | 1-5U |
| 补水到 | 30μl |
- 按已经优化的PCR条件进行一定循环数的PCR（循环数与突变率的关系见下表），然后取5 uL电泳检查。如果没有优化的PCR条件，一般可以先尝试下面的PCR条件：
| PCR前变性 | 94℃ 3分钟 | |
| 易错PCR | 94℃ 1分钟 | |
| 45℃ 1分钟 | 循环30次（见注） | |
| 72℃ 1分钟 |
循环次数与突变几率的关系
易错PCR循环次数决定每个核苷酸位置的突变几率，进而决定每个PCR产物可能得突变位点数，所以所需循环数由客户根据需要改动。
| PCR循环数 | 每个碱基突变几率 | PCR终产物中的突变位点数 | ||||
| 100bp | 200bp | 400bp | 800bp | 1600bp | ||
| 5 | 0.0033 | 0.00 | 0.66 | 1.3 | 2.6 | 5.3 |
| 10 | 0.0066 | 0.66 | 1.3 | 2.6 | 5.3 | 11 |
| 20 | 0.013 | 1.3 | 2.6 | 5.3 | 11 | 21 |
| 30 | 0.020 | 2.0 | 4.0 | 7.9 | 16 | 32 |
| 50 | 0.033 | 3.3 | 6.6 | 13 | 26 | 53 |
- 电泳检测是否得到预计长度的PCR产物。
Q：易错PCR与定点突变PCR有什么区别？
A：定点突变是指通过聚合酶链式反应（PCR）等方法向目的DNA片段（可以是基因组，也可以是质粒）中引入所需变化（通常是表征有利方向的变化），包括碱基的添加、删除、点突变等。它需要预先知道靶基因的序列。易错PCR是一种随机突变，它不需要预先知道靶基因的序列（引物结合部分除外），但需要后续的筛选方法筛选自己所需要的突变。
Q：易错PCR的错误率是多少？
A：易错PCR的突变率为0.66%（±0.13%），对500 bp的PCR产物，相当于有4%的PCR片段为野生型，12%的含一个突变，20%的含两个突变，22%的含三个突变，18%的含四个突变，12%的含五个突变，12%的含六个或更多突变。
Q: 如果需要每个核苷酸有高于0.66%的突变率，如何办？
A: 可以使用连续多次易错PCR来提高突变率。但最好先用胶纯化回收PCR片段,再用于下一轮PCR。此外不能用少于千分之一的第一次PCR产物作为第二轮易错PCR的模板，否则多样性将受到影响。第三轮易错PCR最好使用所有第二轮的PCR产物作为模板，但需要在10mL体系中完成（可以分成很多100uL体系进行）。