BTN101109 柱式粪便RNA提取试剂盒

柱式粪便RNA提取试剂盒说明书
产品编号：BTN101109
规格：50T
产品及特点：
由于粪便中有机质含量丰富，对RT-PCR等后续反应有极大的抑制作用，所以从粪便中提取高纯度的RNA 一直是十分棘手的问题。本产品是在粪便RNA提取试剂盒基础上开发的柱式粪便RNA提取产品，它具有下列特点：
1. 操作比非柱式法更加简单快速，处理一个样品只需要约十几分钟。
2. 去污染效果好，RNA 纯度更高，平均OD260/280 一般都在2.0 左右。
3. 得到的RNA 可直接用于RT-PCR、Northern 杂交、cDNA 合成等实验。
4. 性价比高于进口的柱式粪便RNA 提取产品。
5. 试剂无毒无害, 环保。
规格及成分：

成分	规格
溶液A	50ml
酸洗玻璃珠，400μm	25g
溶液B	15ml
溶液C	50ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脱液	10ml
说明书	1份

保存条件：
常温运输和保存，有效期两年。
自备试剂：
氯仿，RNase-free 收集管。
使用方法：
1. 在自备的3-5 mL 离心管中称取0.5-1 g 粪便，加入0.5g 玻璃珠和1 mL溶液A，盖紧离心盖后震荡器上剧烈震荡5-10 分钟。注意：如果放置在低温，溶液A 可能会产生沉淀，使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
2. 稍微静置后将上清液（一般呈棕色）转移至一个干净的1.5 mL 塑料离心管中。所取上清液不要超过1mL，否则后续操作没有足够空间。
3. 在离心管中加入0.3 mL 的溶液B 和0.2 mL 自备氯仿，在振荡器上振荡30 秒混匀。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
4. 室温12000 rpm 离心3-5 分钟。
5. 将上清液(约0.6 mL)转移到另一干净的1.5 mL 塑料离心管中，下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下100 μL 上清液不取。
6. 在上清液中加入等体积的溶液C，用手上下颠倒或振荡器振荡30 秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。
7. 室温12000 rpm 离心3 分钟，两相间将有白色膜状物(蛋白质)形成。
8. 将一半的溶液转移到离心吸附柱中，套入收集管中厚12000 rpm 室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
9. 将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中， 套入收集管中后12000rpm 室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
10. 加0.7 mL 通用洗柱液，套入收集管中后室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
11. 加0.3 mL 通用洗柱液，套入收集管中后室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。此步可以省略。
12. 将离心吸附柱套入收集管中后室温离心半分钟，弃含穿透液的收集管。
此步干甩十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA 的使用。
13. 将离心吸附柱套入到一个自备的RNase-free 收集管中，加入30-100μL RNA洗脱液，室温放置1-2 分钟。
14. 12000 rpm 室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA 样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
15. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做Northern 杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA 电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA 分子（BioTechniques，28：414，2000）。
16. RNA 产量产率测定：将5-10 μL RNA 溶于TE 缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260 的光吸收。通过光吸收可以得出RNA 浓度（1OD260 的RNA=40 μg/mL），进而计算出RNA 的产量（浓度X 体积)和产率(RNA 产量/组织用量)。
17. RNA 纯度测定：无污染的总RNA 的OD260/OD280 一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR 等反应。